我最近在测尿样中的药物浓度，方法是以前的测量血样的梯度条件，0-3分钟会出现杂质峰，3-8分钟是一条平的线，8-13分钟有杂质出现。我的药物峰应该在3-8分钟之间出现也没有出现。连续进样时都是上述情况。当我单针进样时又正常，在3-8分钟之间出现峰。经过多方排除，怀疑是梯度的问题，我连续等度进样后，一切正常。不过现在还是不太确定是不是这个原因，这个现象不知是什么原因引起的。请求高手指教。




梯度需要覆盖等度才能实现结果




不知道你的梯度是怎么设置的，我考虑你会不会在梯度最后没有给予合适的平衡时间，色谱柱中的流动相洗脱强度还较大就又进一针，这种情况下药物在色谱柱中基本没有保留，直接冲下来，显示在0~3min的杂质峰中。

具体情况还是把你的等度及梯度情况写出来，这样更好分析。




梯度如下：0-6min B% 为98.5%
6.5-9.0min B% 为50%
9-13 min B% 为98.5%
流动相是乙腈、5mM KH2PO4




单从条件上看，起始比例的乙腈有点低1.5%，这个对于仪器也是一种挑战。不知道你的仪器是否在校验期。如果非要这样，建议柱子选用耐水性的柱子如AQ系列的。从流动相看一般缓冲液采用10-20mM，5似乎也有点低。连续进样没有峰，单针进样有峰。是同一个样品吗？梯度变化这么快，估计基线不会太好吧。





等度条件呢？50%的等度么？




柱子是纯水柱，不好意思，浓度写错啦，是50mM的KH2PO4。等度条件98.5%，是同一针样品进样。基线挺好的啊。




等度条件98.5%,估计还没走出来。