按照药典2010版的要求，进行罗红霉素检测。
柱温30℃时，保留时间为27min；
柱温20℃时，保留时间21min；
柱温10℃时，保留时间16min。

困惑一：柱温升高，保留时间怎么会延长？
困惑二：药典说明的保留时间为14min左右，不做说明的话，柱温一般为室温，两者怎么差别这么大？？

流动相、pH（6.5）没问题，等度洗脱（乙腈：0.067mol/L磷酸二氢铵溶液 = 35：:65）。

柱子Agilent SB C18




细心的话你会发现柱温不同时柱压会有所不同，我曾经也遇到个药物，也是这样，柱温40度时保留时间在27分钟左右，将柱温变成30度时保留时间在14分钟左右，后来发现柱温不同时柱子压力也不同，后来我在想估计是这个原因造成，或者药物本身的性质决定的。




实验的过程就是发现问题，解决问题的过程
方法的建立也应该是这样的




相同的色谱条件，不同的柱子保留时间会有差别。保留时间也只是个参考，主要看分离度等参数是否满足要求。




这样的话，药典上的标准，就不是硬性规定了？？

在10摄氏度柱温下，分离度合适的话，能过评审不？




理论上讲柱温高应该出峰时间快，不清楚Agilent SB C18 的孔径是多少，猜测应是孔径和水化后的罗红霉素的分子差不多，温度高导至C18链活动能力增加，更多的罗红霉素分子进入孔径内导致保留时间的增加，可以试孔径更大的柱子，估计结论会不同。




有道理，我试试！





我感觉也是可能是色谱柱的适用性问题，安捷伦的柱子虽然不错，估计会不会是不适用这个样品啊！！~~~~




阿奇霉素也是温度越高保留时间越长，不明白原理！