博来霉素(bleomycin)是由10余种组分组成的混合物, 根据纸色谱Rf值不同分为A、B两族,目前临床使用的博来霉素主要成分为博来霉素A2,和博来霉素B2,USP29中规定:按峰面积归一法A2的含量应在55%到70%之间,B2的含量应在25%到32%之间,B4的含量不超过1%,A2和B2的联合百分含量不少于90%.

现在我们公司从东北一家企业购买了一批货,但是厂家出示的色谱图中A2的峰为两个,如下所示(使用的为USP29标准方法)

结果国外客户提出质疑:说以前他们购入的博来霉素A2色谱图上均为一个峰,这次A2为两个峰(他们自己用HPLC测定的结果也是两个峰),希望我们拿出证据证明这两个峰均为A2.我们打电话给厂家,厂家只说明这两个峰肯定都是A2,分子量都是一样的,但是拿不出质谱图等证明.

现在我们猜测这张图上的两个峰可能是同分异构体(如果不是两种物质的话),想做一个LC-MS来证明我们的推断.请教各位大侠,这样的思路是否可行?是否有更好的办法证明这两个峰均为A2呢?





LC-MS估计分辨不出异构体
这个A2有没有手性碳？你买的对照品就是混旋体？






抱歉到今天才看到您的回复,博来霉素(bleomycin)A、B两族的结构式如下所示:





由上图可见由于是发酵产物,A2的结构类似物有很多,我觉得下图中A2的两个峰有两种可能:
1.两个峰均为A2,但由于手性引起保留行为的差异.这也是我想做LC-MS的原因,如果结果显示这两个峰的分子量一样,均为A2的分子量,那么这两个峰很有可能都为A2.

2.其中有一个峰可能是去甲基A2等结构类似物,这应该也能从分子量上看出.





终于找到一家可以做LC-MS的单位了,图谱如下:
老师说,从图谱上初步可以确定前面的两个峰均为A2,但我不明白该如何分析,也就是如何解谱的，怎么才能从下面的图上看出这两个峰都是Ａ２呢？还望诸高手解惑!





图谱２





图谱３





博莱霉素一组从结构上来说相似，你的图谱我只能说他原料分离的不好，与A2相近的还有四种成分，
分别是博莱霉素A2‘，博莱霉素A2‘‘，去甲基博莱霉素A2以及博莱霉素酸，分子量都相当接近，因此我估计从ms上不太好区分，如果不是纯品的话，话说回来，博莱霉素一组做液相的时候都是用的离子对试剂，请问你们怎么上的MS？




上MS换的没有离子对的流动相

其它成分的分子量差的太大