前几天我摸索着检一个产品,起初用的是waters sunfire c18 柱,4.6*250mm 5um,出现严重拖尾现象。后换用phenomenex柱子,峰形就变宽了,而且高度变小了,之后又换了几种型号的色谱柱还是没解决问题,出现类似的现象,有什么好的解决办法吗?
影响峰形的因素有很多,主要从色谱柱和流动相等方面来改善,
峰拖尾的原因,峰拖尾的主要原因有:
1、 溶解样品的溶剂比流动像更强,
2、 样品量过载,
3、 固定相中的硅醇基与胺类物质相结合反应,
4、 硅胶吸附酸性化合物,
5、 色谱柱柱床中有空隙。
只要确定了拖尾的原因就可以采取措施减少拖尾并消除之。
峰拖尾:原因及解决方案
原因 解决方案
样品溶剂极性强于流动相 在流动相中溶解样品,尽可能降低样品溶剂的强度
样品量过载 减少进样量,
硅醇基与胺类物质的结合 1.调节流动相的pH<3.0。
2.增加流动相的离子强度,25mM~50mM。
3.流动相中增加竞争性的胺类,10mM的TEA(三乙胺)。
4.选择低硅醇活性的固定相。
5.酸性物质在硅胶上的吸附 1. 增加流动相中盐的浓度,25mM~50mM。
2. 调节流动相的pH<3.0
3. 增加竞争性的有机酸,1%醋酸或者是0.1%TFA(三氟乙酸)
柱子空隙 更换新的色谱柱
谢谢iuui同志,我用的溶剂是0.9%氯化钠,流动相是乙腈-水,我在想可能是柱子本身的问题大一点,再试试别的性能的柱子吧。
影响峰形的因素有很多,主要从色谱柱和流动相等方面来改善,
峰拖尾的原因,峰拖尾的主要原因有:
1、 溶解样品的溶剂比流动像更强,
2、 样品量过载,
3、 固定相中的硅醇基与胺类物质相结合反应,
4、 硅胶吸附酸性化合物,
5、 色谱柱柱床中有空隙。
只要确定了拖尾的原因就可以采取措施减少拖尾并消除之。
峰拖尾:原因及解决方案
原因 解决方案
样品溶剂极性强于流动相 在流动相中溶解样品,尽可能降低样品溶剂的强度
样品量过载 减少进样量,
硅醇基与胺类物质的结合 1.调节流动相的pH<3.0。
2.增加流动相的离子强度,25mM~50mM。
3.流动相中增加竞争性的胺类,10mM的TEA(三乙胺)。
4.选择低硅醇活性的固定相。
5.酸性物质在硅胶上的吸附 1. 增加流动相中盐的浓度,25mM~50mM。
2. 调节流动相的pH<3.0
3. 增加竞争性的有机酸,1%醋酸或者是0.1%TFA(三氟乙酸)
柱子空隙 更换新的色谱柱
谢谢iuui同志,我用的溶剂是0.9%氯化钠,流动相是乙腈-水,我在想可能是柱子本身的问题大一点,再试试别的性能的柱子吧。