我现在做一项目，极性差距较大，出峰早的呢，需要8%的乙腈（水相为磷酸盐缓冲液pH6.0），出峰晚的呢需要60%的乙腈（水相为磷酸盐缓冲液pH6.0），大家谁来给我设计一个，几乎没有梯度峰的梯度表（每次梯度走的杂质峰很多）呀！我的检测波长较低，在220nm波长下！




哪个是主峰，保留时间各多少，什么的都不清楚啊。
走梯度大多情况下会出现基线漂移，是正常的。
至于出现杂质峰，多是实验条件限制造成




在低波长 要想梯度好看，延长梯度改变时间和使用高级别试剂是关键。




基本上全部用色谱纯试剂把，要不然就乱了




可以采用如下梯度
0--t时间内，起始比例等度洗脱
t--t+x时间内，线性变化至高浓度即可
t+x--后继续等度洗脱
其实梯度方法大多都是这样，至于出梯度峰峰跟梯度设计并无太大关系，而是跟试剂设备关系较大。
在梯度洗脱中，鄙人曾经在205nm下，乙腈与磷酸缓冲液梯度洗脱，无论如何设计，梯度中均有鬼峰，只是大小问题。但只要鬼峰可重现，不影响样品杂质，扣除空白即可




完事对系统多冲冲，可以考虑低流速过夜，这也是影响梯度峰的一大因素。