公司现在做个原料药的杂质，欧洲药典美国药典相同的方法，10mM，pH7.6磷酸缓冲液：乙腈（75：25），在此比例上微调，试方法。供试品用甲醇溶解，然后流动相定容的。
试了两根宽pH的柱子，其中一根A柱为新柱用了20多天，方法试的差不多了，突然第二天用，就出现肩峰，例如原先800多万峰面积，就变成了530万和260万，经PDA检测器证实是同一个物质，即不是降解的杂质。另一根柱子B柱，在试了大约4天后也出现同样情况。
另外我们这个产品的制剂，溶出度的方法一样的色谱条件，用了根普通柱C柱，pH2-8的柱子，一直用没问题（大约有四十次，每次60针左右），溶出介质是pH6.8的磷酸缓冲液，这个峰面积也有500万左右。后来拿这根C柱，进有关物质的方法，第二天发现也出现肩峰。
这个问题不知道什么情况，是我的供试品有杂质残留么？杂质没洗脱出来影响有这么大？还是我的色谱方法哪不对劲？我们买的原料药，该厂家是按欧洲药典检的合格，难道有些药典上没有的杂质？
期待大家的解答，万分感谢！
看看洗柱子方式是否正确。
如果我猜的没错的话应该是甲醇的问题。样品溶解液与流动相极性相差太大，用流动相溶解，或者减少甲醇的进样量就能解决问题。比如原来样品溶液为0.5mg/ml，进样量为20ul，改为1mg/ml，进样量10ul。希望能够对您有所帮助
肩峰有可能是柱筛板脏了，说说我最近的经历吧，和你有点相似，不知能否帮上你的忙。
我做的也是一个原料，流动相甲醇-水=44:55，甲醇是天地的，水是灭菌注射用水过0.22um膜，样品也是拿过膜后水溶解的。主要做有关物质，进样浓度0.5mg/ml，也不是很大。这实验做上了就发现特别费柱子，柱压一天比一天高，直到高的离谱。前后试过两根柱子，第一根国产的，用了大概20天，柱压高的不行，而且后来有肩峰了，仪器一切正常，以为是柱子坏了；换了一根安捷伦柱子。没想到安捷伦柱子寿命更短，用了半个月峰就分叉了，想着安捷伦的柱子应该质量没问题，就打800问，安的工程师对他们的柱子更有信心，他基本上一口坚持柱子质量没问题，而且说安捷伦的柱子不会塌陷，让我把筛板洗一下。没想到把筛板拿酸洗过后，真的就好了，把原来的国产柱子筛板处理了一下，也好了，峰不分叉了。
ps：现在我也没找出原因，为什么做这个样品的时候筛板那么容易堵，连着两根柱子都堵了，以前做过很多比这要脏的样品，筛板都好着，这次就是堵的不行。
改变进样量呢，或者柱子在用完后清洗不干净
根柱子工程师也沟通过，确认洗柱子方式没问题的
如果是这个问题的话，第一针就能看出来了。这个是作了一段时间出现的。且甲醇占供试品溶液的5%，流动相占95%。不过谢谢您的解答
我刚用了安捷伦的，三天就出肩峰了。请问是直接把柱子进口拆了，取下柱筛板么？还要注意些什么么？从来没处理过。这个柱子反接用异丙醇冲可以么？
可以反接冲下，再正过来试试。新柱子不要随便打开筛板，开了装上柱头不会如起初那么好的。
现在就是不知道什么原因造成的。我们做的埃索美拉唑镁，这几天试了安捷伦的柱子，第三天也出现这个情况了，真是迷茫啊
你去查查药典规定的色谱柱子是什么？这个pH还是有点高的。
怎么都是安捷伦柱子的问题，难道他们的柱子运用范围非常窄？
搞不清楚他们的了
使用保护柱或是预柱会好些，同时注意冲洗，及样品浓度等
试了两根宽pH的柱子，其中一根A柱为新柱用了20多天，方法试的差不多了，突然第二天用，就出现肩峰，例如原先800多万峰面积，就变成了530万和260万，经PDA检测器证实是同一个物质，即不是降解的杂质。另一根柱子B柱，在试了大约4天后也出现同样情况。
另外我们这个产品的制剂，溶出度的方法一样的色谱条件，用了根普通柱C柱，pH2-8的柱子，一直用没问题（大约有四十次，每次60针左右），溶出介质是pH6.8的磷酸缓冲液，这个峰面积也有500万左右。后来拿这根C柱，进有关物质的方法，第二天发现也出现肩峰。
这个问题不知道什么情况，是我的供试品有杂质残留么？杂质没洗脱出来影响有这么大？还是我的色谱方法哪不对劲？我们买的原料药，该厂家是按欧洲药典检的合格，难道有些药典上没有的杂质？
期待大家的解答，万分感谢！
看看洗柱子方式是否正确。
如果我猜的没错的话应该是甲醇的问题。样品溶解液与流动相极性相差太大，用流动相溶解，或者减少甲醇的进样量就能解决问题。比如原来样品溶液为0.5mg/ml，进样量为20ul，改为1mg/ml，进样量10ul。希望能够对您有所帮助
肩峰有可能是柱筛板脏了，说说我最近的经历吧，和你有点相似，不知能否帮上你的忙。
我做的也是一个原料，流动相甲醇-水=44:55，甲醇是天地的，水是灭菌注射用水过0.22um膜，样品也是拿过膜后水溶解的。主要做有关物质，进样浓度0.5mg/ml，也不是很大。这实验做上了就发现特别费柱子，柱压一天比一天高，直到高的离谱。前后试过两根柱子，第一根国产的，用了大概20天，柱压高的不行，而且后来有肩峰了，仪器一切正常，以为是柱子坏了；换了一根安捷伦柱子。没想到安捷伦柱子寿命更短，用了半个月峰就分叉了，想着安捷伦的柱子应该质量没问题，就打800问，安的工程师对他们的柱子更有信心，他基本上一口坚持柱子质量没问题，而且说安捷伦的柱子不会塌陷，让我把筛板洗一下。没想到把筛板拿酸洗过后，真的就好了，把原来的国产柱子筛板处理了一下，也好了，峰不分叉了。
ps：现在我也没找出原因，为什么做这个样品的时候筛板那么容易堵，连着两根柱子都堵了，以前做过很多比这要脏的样品，筛板都好着，这次就是堵的不行。
改变进样量呢，或者柱子在用完后清洗不干净
根柱子工程师也沟通过，确认洗柱子方式没问题的
如果是这个问题的话，第一针就能看出来了。这个是作了一段时间出现的。且甲醇占供试品溶液的5%，流动相占95%。不过谢谢您的解答
我刚用了安捷伦的，三天就出肩峰了。请问是直接把柱子进口拆了，取下柱筛板么？还要注意些什么么？从来没处理过。这个柱子反接用异丙醇冲可以么？
可以反接冲下，再正过来试试。新柱子不要随便打开筛板，开了装上柱头不会如起初那么好的。
现在就是不知道什么原因造成的。我们做的埃索美拉唑镁，这几天试了安捷伦的柱子，第三天也出现这个情况了，真是迷茫啊
你去查查药典规定的色谱柱子是什么？这个pH还是有点高的。
怎么都是安捷伦柱子的问题，难道他们的柱子运用范围非常窄？
搞不清楚他们的了
使用保护柱或是预柱会好些，同时注意冲洗，及样品浓度等
| Related substances 从这些柱子上看，也没什么特殊的。 买的安捷伦pH2-9的，另外2个牌子pH到11和12的，这几根都出现了，就是最后那根用了20多天，前面两根都是3天多，现在都不敢试柱子了。我没买过预柱，这个贵么？我现在就是找不到原因，怕这个也解决不了。冲洗现在基本上2个小时多了，1.0的流速，感觉时间挺久了。 hehewang wrote: |