最近在做分离，目的是得到黄酮类对照品（纯度达90％以上即可），以前没做过类似工作，遇到问题，请各位不吝赐教。
收集的样品一般呈淡黄至黄绿色，但浓缩(旋转蒸发)后得到的样品颜色不稳定，有时候是黄色，有时候是棕色，而有时候又是褐色，得到的样品基本呈溶液状，有时有部分絮状物。
样品HPLC检测纯度为92%。将检测后样品挥干溶剂后，得到褐色粉状物质(原样品溶液即为褐色)。
以前师兄制备的该对照品为黄色，为什么我得到的却是褐色？是否与含量、浓度、溶解溶剂量等有关？
考虑重结晶，但除目标物外，其余成分量非常少，而且相关物质的溶解性等亦不清楚。如果重结晶，请问一般需要注意哪些问题？
请各位帮助，无助中。
自己一点浅显的体会：
1 黄酮类成分，比较不稳定，尤其纯度上去以后，你浓缩时要注意，样品会随着浓缩时间的变化而加深，尤其是温度超过80度时，尤甚。
2 我做的时候是一些粘状物，我觉得可能是与你说的部分絮状物是一致的，可能是每个人的说法差异而已；这个东西很容易去掉，例如：上一下凝胶等
3 黄酮类成分的颜色与纯度有着巨大的关系，纯度有稍微的差别，样品颜色相距就很大，溶解后就很容易看到差别了；你师兄的对照品为黄色，这是个正常的颜色，我做的是浅黄色，甚至接近白色，但是你仔细看看，其颜色也是比较深的，你的样品纯度才92%，所以是褐色相当正常。
4 你如果重结晶的话，就要注意溶剂的选择，黄酮类成分对溶剂相当挑剔，稍微的差别就会出现一个是结不出来晶，一个是近白色纯品，这个活要相当的细心，注意观察此步试验的所有现象。
楼上。
我浓缩后有时得到黄色，有时是褐色。将浓缩温度调低后现象依然如此。所有实验操作都是平行的。感觉很迷惑。
请问能否给点建议，如何进一步纯化？
我觉得可能和光反应有关，你可以尝试用棕色和无色瓶做对比试验，如果极性不是非常大，可以在OSD柱上作分离。
我最近也在分离黄酮类对照品，本来也想用重结晶办法获得较纯的晶体，但用氯仿－甲醇体系很难析出规整的晶体！因此建议有条件的话用制备色谱做或者用水－醇体系摸索！
我也曾遇到过同样的问题，尤其是用液相制备，黄酮浓缩后，状态很不好，有时油油的，颜色为黄褐色，后来导师建议我再上遍硅胶柱，用GF254的薄层硅胶上柱，当天洗脱完，由于GF254的粒径很细，流速很慢，所以要加压。效果非常好，很纯，颜色近乎白色（氯仿甲醇系统，由于样品少，近30mg, s所以用10ml的小瓶接的流分，然后放到通风厨挥干），死吸附也很少。 你可以试试看。 注意，黄酮样品纯化后，要闭光放到干燥处保存。
用石油醚萃取一下，效果可能会好一些！
所得到的黄酮就是用甲醇-水体系洗脱后浓缩的，是否可以调整比例进行重结晶？可以的话，应当如何调整？
如果用GF254硅胶上柱，应该如何选择氯仿甲醇体系？
黄酮类化合物一般很难重结晶，一般的操作（所谓的重结晶）就是析出沉淀，但纯度不够，所以不理想。
如果上硅胶GF254的柱子，最好用一种溶剂系统直接洗脱，氯仿甲醇的比例以Rf值为0.2至0.3，即比普通硅胶柱大一点就行，另外还要注意硅胶不要太多，硅胶与样品的比例在20：1至50：1，比例太大很耗费时间。
黄酮类化合物溶解性不好，所以拌样时，样品可能要加温超声溶解，效果要好些。
你有冷冻干燥的设备没有?我以前也做过这方面的课题,将样品直接冷冻干燥,所得粉末颜色很浅。
要得到高纯度的样品，可以反复硅胶柱层析。
楼上。
我浓缩后有时得到黄色，有时是褐色。将浓缩温度调低后现象依然如此。所有实验操作都是平行的。感觉很迷惑。
今天HPLC对样品进行了测定，发现样品纯度和颜色没有相关性，有的呈很漂亮的黄色结晶，纯度却只有60％左右，而有的呈褐色，连上溶剂峰，纯度也有90％多。
真是迷惑
收集的样品一般呈淡黄至黄绿色，但浓缩(旋转蒸发)后得到的样品颜色不稳定，有时候是黄色，有时候是棕色，而有时候又是褐色，得到的样品基本呈溶液状，有时有部分絮状物。
样品HPLC检测纯度为92%。将检测后样品挥干溶剂后，得到褐色粉状物质(原样品溶液即为褐色)。
以前师兄制备的该对照品为黄色，为什么我得到的却是褐色？是否与含量、浓度、溶解溶剂量等有关？
考虑重结晶，但除目标物外，其余成分量非常少，而且相关物质的溶解性等亦不清楚。如果重结晶，请问一般需要注意哪些问题？
请各位帮助，无助中。
自己一点浅显的体会：
1 黄酮类成分，比较不稳定，尤其纯度上去以后，你浓缩时要注意，样品会随着浓缩时间的变化而加深，尤其是温度超过80度时，尤甚。
2 我做的时候是一些粘状物，我觉得可能是与你说的部分絮状物是一致的，可能是每个人的说法差异而已；这个东西很容易去掉，例如：上一下凝胶等
3 黄酮类成分的颜色与纯度有着巨大的关系，纯度有稍微的差别，样品颜色相距就很大，溶解后就很容易看到差别了；你师兄的对照品为黄色，这是个正常的颜色，我做的是浅黄色，甚至接近白色，但是你仔细看看，其颜色也是比较深的，你的样品纯度才92%，所以是褐色相当正常。
4 你如果重结晶的话，就要注意溶剂的选择，黄酮类成分对溶剂相当挑剔，稍微的差别就会出现一个是结不出来晶，一个是近白色纯品，这个活要相当的细心，注意观察此步试验的所有现象。
楼上。
我浓缩后有时得到黄色，有时是褐色。将浓缩温度调低后现象依然如此。所有实验操作都是平行的。感觉很迷惑。
请问能否给点建议，如何进一步纯化？
我觉得可能和光反应有关，你可以尝试用棕色和无色瓶做对比试验，如果极性不是非常大，可以在OSD柱上作分离。
我最近也在分离黄酮类对照品，本来也想用重结晶办法获得较纯的晶体，但用氯仿－甲醇体系很难析出规整的晶体！因此建议有条件的话用制备色谱做或者用水－醇体系摸索！
我也曾遇到过同样的问题，尤其是用液相制备，黄酮浓缩后，状态很不好，有时油油的，颜色为黄褐色，后来导师建议我再上遍硅胶柱，用GF254的薄层硅胶上柱，当天洗脱完，由于GF254的粒径很细，流速很慢，所以要加压。效果非常好，很纯，颜色近乎白色（氯仿甲醇系统，由于样品少，近30mg, s所以用10ml的小瓶接的流分，然后放到通风厨挥干），死吸附也很少。 你可以试试看。 注意，黄酮样品纯化后，要闭光放到干燥处保存。
用石油醚萃取一下，效果可能会好一些！
所得到的黄酮就是用甲醇-水体系洗脱后浓缩的，是否可以调整比例进行重结晶？可以的话，应当如何调整？
如果用GF254硅胶上柱，应该如何选择氯仿甲醇体系？
黄酮类化合物一般很难重结晶，一般的操作（所谓的重结晶）就是析出沉淀，但纯度不够，所以不理想。
如果上硅胶GF254的柱子，最好用一种溶剂系统直接洗脱，氯仿甲醇的比例以Rf值为0.2至0.3，即比普通硅胶柱大一点就行，另外还要注意硅胶不要太多，硅胶与样品的比例在20：1至50：1，比例太大很耗费时间。
黄酮类化合物溶解性不好，所以拌样时，样品可能要加温超声溶解，效果要好些。
你有冷冻干燥的设备没有?我以前也做过这方面的课题,将样品直接冷冻干燥,所得粉末颜色很浅。
要得到高纯度的样品，可以反复硅胶柱层析。
楼上。
我浓缩后有时得到黄色，有时是褐色。将浓缩温度调低后现象依然如此。所有实验操作都是平行的。感觉很迷惑。
今天HPLC对样品进行了测定，发现样品纯度和颜色没有相关性，有的呈很漂亮的黄色结晶，纯度却只有60％左右，而有的呈褐色，连上溶剂峰，纯度也有90％多。
真是迷惑