正丁醇层的成点性很不好，我主要试了氯仿－甲醇－水，二氯甲烷－甲醇－水展开系统，跑出来的都是一条线，加酸也一样成线。那位高手帮帮我吧！我会感激不尽的!!!
过反向试试吧，正丁醇层含有大量的皂苷类成分，级性比较大的
正丁醇部位的分离一向是分离工作中的难点，但由于其出新率远高于小极性部位，所以还是值得下一番功夫的。
一般来说，正丁醇部位往往含有单糖、二糖等小分子糖，多种酚类化合物，以及苷类化合物，极性较大，在硅胶柱上吸附较多，成点性差，分离效果不好。因此，一般说来，对于正丁醇部位可采取以下方法：
1. 大孔树脂柱分段。 水溶后上样，依次用水，30%、60%、95%乙醇溶液洗脱，分别合并、收集。一般说来目标化合物多在60%段，水，30%段多为一些水溶性单糖、二糖及多酚类化合物，可以考虑弃去。而95%部分多和乙酸乙酯部位大极性段重叠，可以乙酸乙酯部位合并处理。
2. 反相硅胶分段。 如果正丁醇部位量不是太大，或者课题组有大反相柱，可以考虑用反相柱砍段。本课题组就有一根500g的反相柱，专门用于砍段，效果比正相柱好了许多。唯一需要提醒注意的是，由于我们一般是用正相硅胶板检测化合物分离情况，所以反相柱 砍段后往往各组份在硅胶板上看起来比较混乱，不如硅胶柱砍段后那么直观，一定要小心对比，否则会越分越乱。
3.正相柱分配色谱层析。 如果正丁醇部位量太大，或者课题组没有大的相柱用来分段，那么可以考虑氯仿：甲醇：水 体系来砍段。我一般用8：2：1、7：3：1以及6.5：3.5：1依次洗脱，效果不会很好，但两到三次反复上柱后各部分还是可以看得到点的。这时再会反相柱细分，拿十到二十个点应该没问题的。
总的说来，正丁醇部位的分离是我们分离工作中的一个难点，以上简单地说了说我的一些工作经验，抛砖引玉而已。呵呵。
用氯仿－甲醇－水系统时 氯仿与甲醇的比用7:3或6.5:3.5,这样的比例成点比较好,然后根据需要调节水的比例就OK了
飞扬跋扈为谁雄.
我还有个问题,就是上了HP20大孔吸附树脂分离效果不理想,洗下来的东西大部分都集中在30%,50%乙醇溶液里.所以合并之后上了硅胶柱砍的段,效果也不是很好.接下来量大的刚上了HP2MGL,不知效果会怎么样.除了这个还有什么好办法吗?上反相柱不会污染柱子吗?
呵呵，反相柱当然会被污染一些，但如果样品不是很脏的话，问题不是很大，毕竟它至少在30%,50%乙醇里是溶解的啊。以前做博士时，课题组经费很紧，一般样品起码要先过一遍凝胶柱才敢上反相。现在反相硅胶也不算很贵了，而且每次用甲醇多洗洗，起码用上两、三年没问题。实在不行，就把上面刮掉薄薄一层就可以了。
另外，用三相系统冲洗正相柱，有时效果也还可以。我喜欢用水饱和氯仿与甲醇直接按比例配后冲柱，比较方便，而且回收后的溶剂用水洗后，分去水层后，水饱和氯仿还可以再次使用。
还有，我认为用大孔吸附树脂砍一次段就可以了，不用反复再上，毕竟它的砍段效果不是特别好。而且用它砍段后，各部位重叠严重，会给下一步分离带来许多麻烦。
哦,我又学到了不少好东西呀,真高兴!!!
飞扬跋扈为谁雄,你真是位好兄弟呀!
多谢了
非常赞成飞扬跋扈为谁雄的观点，建议加分！
我的水溶性样品上树脂后分别用20％和60％的甲醇水洗脱，跑薄层板的效果要明显好过直接用60％甲醇水冲洗。20％的组分加硫酸蒽酮后明显呈阳性，说明有多糖，而60％的组分就没有糖了，用60％的组分跑薄层呈点性很好，不像直接拿以前的样品很容易跑出椭圆形的长斑和线，所以寡糖、多酚等大极性杂质确实会明显干扰TLC，即使20％组分有活性，我宁肯将其弃去，去研究60％组分。
另外想问一下两个问题，
1、反相柱现在的价格如何？我的物质极性也算非常大了，看来不用反相柱无法分纯了
2、我的发酵液中的物质用水饱和正丁醇萃取都无法萃出，但是蒸干以后加氯仿都能够溶解，虽然溶解度肯定不如甲醇了，请问这矛盾吗？
！：）
谈谈我看法吧.
用水饱和正丁醇萃不出东西,应该是说明你的东西的极性不大.所以溶于氯仿是很正常的呀.
甲醇的溶解性是很强的,石油醚层的一部分东西也溶于甲醇,所以不矛盾.
我也建议给飞扬跋扈为谁雄加分!!!
我想上凝胶,我的样品溶于水,我打算用甲醇--水系统洗脱.我应该用什么样的比例洗脱呀?先得用水洗么?然后依次加大甲醇的比例么? (0,30%,50%,70%,100%)听说这么洗可能会产生气泡,还有一点就是用甲醇--水洗的话速度会很慢,我可以在中压柱跑么?流速大概控制在什么样的范围内比较好呢?
谈谈我看法吧.
用水饱和正丁醇萃不出东西,应该是说明你的东西的极性不大.所以溶于氯仿是很正常的呀.
甲醇的溶解性是很强的,石油醚层的一部分东西也溶于甲醇,所以不矛盾.
呵呵，看来关心这个话题的朋友还是很多啊。
先来回答一下ZARD的问题：
一般说来，相似相溶原理是大原则，但还要记住，不溶只是相对的，而溶解才是绝对的，因此大极性的化合物在氯仿中有一定的溶解度不足为奇，何况还只是混合物而已。化合物的极性大小取决于它的结构，与溶解度的大小没有必然的联系。
这两年凝胶的价格在涨，小包装的每公斤2万多了吧。而反相还维持在1万多些，一根100多克的小柱子能用上两三年，基本能够承受。当然这是进口的价格，国产的会便宜许多。不过国产的用起来要痛苦许多，效果基本与正相相似。咳，我心爱的国货啊。
再来看一下20070707的贴子：
我想上凝胶,我的样品溶于水,我打算用甲醇--水系统洗脱.我应该用什么样的比例洗脱呀?先得用水洗么?然后依次加大甲醇的比例么? (0,30%,50%,70%,100%)听说这么洗可能会产生气泡,还有一点就是用甲醇--水洗的话速度会很慢,我可以在中压柱跑么?流速大概控制在什么样的范围内比较好呢?
多谢楼上的解释！很长见识：）
多谢飞扬跋扈为谁雄，很实用
正丁醇相如果用加水的体系展开或冲柱，那么是不是应该用反相板或反相柱，我记得好像水能溶正相硅胶吧？
我上次分正丁醇层时也是用用大孔树脂划段，水部分（还是30％乙醇部分？）用正丁醇：醋酸：水＝4：1：5（上相）跑正相硅胶板时能看到很多点，效果不错，建议试试。
多谢飞扬跋扈为谁雄一直对我实验的指导.
我听同学说常压下甲醇/水1:1洗脱效果不错,所以这次上的凝胶柱是在常压下跑的.我的师姐用中压跑过凝胶柱,效果不错,流速也能加快.
呵呵，好啊。共同进步啊。
我们实验事没有反向柱子，但是我分的东西大极性的很多，底下全是红色条，上面隐约有黄点，这样怎样能分离？
我们实验事没有反向柱子，但是我分的东西大极性的很多，底下全是红色条，上面隐约有黄点，这样怎样能分离？
飞扬跋扈为谁雄 感觉您在做大极性部位的分离经验很多啊，希望能得到您的赐教。
我发现在做反相柱时，样品溶解是一个很大的问题，我做的主要是苷类样品。上反相柱时用甲醇或者甲醇水溶解有点困难，基本上溶解体积都在500ml左右（柱子C18量为700g左右），这样上样体积很大；特别有的样品只能用甲醇溶解（洗脱剂为甲醇水＝5：5），这样无形中增大了开始上样时反相中的洗脱能力，使分离效果减弱；
希望能得到一些关于反相样品上柱时溶解方面的赐教，大家也可以讨论讨论啊。！
飞扬跋扈为谁雄 感觉您在做大极性部位的分离经验很多啊，希望能得到您的赐教。
我发现在做反相柱时，样品溶解是一个很大的问题，我做的主要是苷类样品。上反相柱时用甲醇或者甲醇水溶解有点困难，基本上溶解体积都在500ml左右（柱子C18量为700g左右），这样上样体积很大；特别有的样品只能用甲醇溶解（洗脱剂为甲醇水＝5：5），这样无形中增大了开始上样时反相中的洗脱能力，使分离效果减弱；
希望能得到一些关于反相样品上柱时溶解方面的赐教，大家也可以讨论讨论啊。！
我刚刚用氯仿：甲醇：水＝7：3：0.5展开的正丁醇部分，结果分离效果很好，你可以试试。
值得学习。
飞扬跋扈为谁雄 经验的分享
目前我也大部分是采用拟说得第二中方法上样的。但我自己心里始终有一个疑问，那就是 你说的 “慢慢沉降” 会形成目标样品成分在色谱柱中 “过长”，分离效果就会降低。您如何看待这个问题？
还有，一般C18柱过完一次样品后，做什么的处理才能彻底的除掉C18中残留的物质，我一般是用甲醇，丙酮处理；但是发现再过另一个样品时，会有些杂质峰产生，所以担心是上次过柱时C18清洗不干净而产生的。
大家可以讨论下如何清洗C18填料的问题，同时保证C18少受到污染和破坏！不胜赐教，！
可能是我说的不太清楚，一般只在混悬物漂浮在流动相中无法沉降，或是混悬物过多堵塞柱子时，才将反相柱上层硅胶轻轻搅起，并使其慢慢沉降。而且一般只搅起薄薄一层即可。其厚度略等同于正相柱干法上样的样品层高度，因此对分离效果影响不是太大。
另外，反相柱过完样品后，一般只需用甲醇冲洗几个柱体积就足够了。即使有少量残留物，也应该是些小极性色素类物质。由于我们的流动相不会是纯甲醇，因此再上下一个样品时，即使上次有少量残留，也应该不会和样品一起被冲下，不会对分离有太大影响。
！飞扬跋扈为谁雄
1. 大孔树脂柱分段。 水溶后上样，依次用水，30%、60%、95%乙醇溶液洗脱，分别合并、收集。一般说来目标化合物多在60%段，水，30%段多为一些水溶性单糖、二糖及多酚类化合物，可以考虑弃去。而95%部分多和乙酸乙酯部位大极性段重叠，可以乙酸乙酯部位合并处理。
其实，30％段还是有些东西的，我的正丁醇部位出现的一个点，在树脂的30％段富集，干扰还少。
俺现在做的也是正丁醇相的部分 ，首先用大孔树脂分段 再用ODS分 ，至于最后的细分 我觉的mci 的效果要比ods的好 而且流速比较快 （个人意见），至于上样过程 可以用dmso 溶解性很好
呵呵，是啊，MCI的分离效果也是不错的，只是没法摸条件，而ODS可以用HPLC和反相板来摸条件，会事半功倍一些。楼上用MCI上柱，有什么好的经验，可以来聊聊啊。
过反向试试吧，正丁醇层含有大量的皂苷类成分，级性比较大的
正丁醇部位的分离一向是分离工作中的难点，但由于其出新率远高于小极性部位，所以还是值得下一番功夫的。
一般来说，正丁醇部位往往含有单糖、二糖等小分子糖，多种酚类化合物，以及苷类化合物，极性较大，在硅胶柱上吸附较多，成点性差，分离效果不好。因此，一般说来，对于正丁醇部位可采取以下方法：
1. 大孔树脂柱分段。 水溶后上样，依次用水，30%、60%、95%乙醇溶液洗脱，分别合并、收集。一般说来目标化合物多在60%段，水，30%段多为一些水溶性单糖、二糖及多酚类化合物，可以考虑弃去。而95%部分多和乙酸乙酯部位大极性段重叠，可以乙酸乙酯部位合并处理。
2. 反相硅胶分段。 如果正丁醇部位量不是太大，或者课题组有大反相柱，可以考虑用反相柱砍段。本课题组就有一根500g的反相柱，专门用于砍段，效果比正相柱好了许多。唯一需要提醒注意的是，由于我们一般是用正相硅胶板检测化合物分离情况，所以反相柱 砍段后往往各组份在硅胶板上看起来比较混乱，不如硅胶柱砍段后那么直观，一定要小心对比，否则会越分越乱。
3.正相柱分配色谱层析。 如果正丁醇部位量太大，或者课题组没有大的相柱用来分段，那么可以考虑氯仿：甲醇：水 体系来砍段。我一般用8：2：1、7：3：1以及6.5：3.5：1依次洗脱，效果不会很好，但两到三次反复上柱后各部分还是可以看得到点的。这时再会反相柱细分，拿十到二十个点应该没问题的。
总的说来，正丁醇部位的分离是我们分离工作中的一个难点，以上简单地说了说我的一些工作经验，抛砖引玉而已。呵呵。
用氯仿－甲醇－水系统时 氯仿与甲醇的比用7:3或6.5:3.5,这样的比例成点比较好,然后根据需要调节水的比例就OK了
飞扬跋扈为谁雄.
我还有个问题,就是上了HP20大孔吸附树脂分离效果不理想,洗下来的东西大部分都集中在30%,50%乙醇溶液里.所以合并之后上了硅胶柱砍的段,效果也不是很好.接下来量大的刚上了HP2MGL,不知效果会怎么样.除了这个还有什么好办法吗?上反相柱不会污染柱子吗?
呵呵，反相柱当然会被污染一些，但如果样品不是很脏的话，问题不是很大，毕竟它至少在30%,50%乙醇里是溶解的啊。以前做博士时，课题组经费很紧，一般样品起码要先过一遍凝胶柱才敢上反相。现在反相硅胶也不算很贵了，而且每次用甲醇多洗洗，起码用上两、三年没问题。实在不行，就把上面刮掉薄薄一层就可以了。
另外，用三相系统冲洗正相柱，有时效果也还可以。我喜欢用水饱和氯仿与甲醇直接按比例配后冲柱，比较方便，而且回收后的溶剂用水洗后，分去水层后，水饱和氯仿还可以再次使用。
还有，我认为用大孔吸附树脂砍一次段就可以了，不用反复再上，毕竟它的砍段效果不是特别好。而且用它砍段后，各部位重叠严重，会给下一步分离带来许多麻烦。
哦,我又学到了不少好东西呀,真高兴!!!
飞扬跋扈为谁雄,你真是位好兄弟呀!
多谢了
非常赞成飞扬跋扈为谁雄的观点，建议加分！
我的水溶性样品上树脂后分别用20％和60％的甲醇水洗脱，跑薄层板的效果要明显好过直接用60％甲醇水冲洗。20％的组分加硫酸蒽酮后明显呈阳性，说明有多糖，而60％的组分就没有糖了，用60％的组分跑薄层呈点性很好，不像直接拿以前的样品很容易跑出椭圆形的长斑和线，所以寡糖、多酚等大极性杂质确实会明显干扰TLC，即使20％组分有活性，我宁肯将其弃去，去研究60％组分。
另外想问一下两个问题，
1、反相柱现在的价格如何？我的物质极性也算非常大了，看来不用反相柱无法分纯了
2、我的发酵液中的物质用水饱和正丁醇萃取都无法萃出，但是蒸干以后加氯仿都能够溶解，虽然溶解度肯定不如甲醇了，请问这矛盾吗？
！：）
谈谈我看法吧.
用水饱和正丁醇萃不出东西,应该是说明你的东西的极性不大.所以溶于氯仿是很正常的呀.
甲醇的溶解性是很强的,石油醚层的一部分东西也溶于甲醇,所以不矛盾.
我也建议给飞扬跋扈为谁雄加分!!!
我想上凝胶,我的样品溶于水,我打算用甲醇--水系统洗脱.我应该用什么样的比例洗脱呀?先得用水洗么?然后依次加大甲醇的比例么? (0,30%,50%,70%,100%)听说这么洗可能会产生气泡,还有一点就是用甲醇--水洗的话速度会很慢,我可以在中压柱跑么?流速大概控制在什么样的范围内比较好呢?
谈谈我看法吧.
用水饱和正丁醇萃不出东西,应该是说明你的东西的极性不大.所以溶于氯仿是很正常的呀.
甲醇的溶解性是很强的,石油醚层的一部分东西也溶于甲醇,所以不矛盾.
呵呵，看来关心这个话题的朋友还是很多啊。
先来回答一下ZARD的问题：
一般说来，相似相溶原理是大原则，但还要记住，不溶只是相对的，而溶解才是绝对的，因此大极性的化合物在氯仿中有一定的溶解度不足为奇，何况还只是混合物而已。化合物的极性大小取决于它的结构，与溶解度的大小没有必然的联系。
这两年凝胶的价格在涨，小包装的每公斤2万多了吧。而反相还维持在1万多些，一根100多克的小柱子能用上两三年，基本能够承受。当然这是进口的价格，国产的会便宜许多。不过国产的用起来要痛苦许多，效果基本与正相相似。咳，我心爱的国货啊。
再来看一下20070707的贴子：
我想上凝胶,我的样品溶于水,我打算用甲醇--水系统洗脱.我应该用什么样的比例洗脱呀?先得用水洗么?然后依次加大甲醇的比例么? (0,30%,50%,70%,100%)听说这么洗可能会产生气泡,还有一点就是用甲醇--水洗的话速度会很慢,我可以在中压柱跑么?流速大概控制在什么样的范围内比较好呢?
多谢楼上的解释！很长见识：）
多谢飞扬跋扈为谁雄，很实用
正丁醇相如果用加水的体系展开或冲柱，那么是不是应该用反相板或反相柱，我记得好像水能溶正相硅胶吧？
我上次分正丁醇层时也是用用大孔树脂划段，水部分（还是30％乙醇部分？）用正丁醇：醋酸：水＝4：1：5（上相）跑正相硅胶板时能看到很多点，效果不错，建议试试。
多谢飞扬跋扈为谁雄一直对我实验的指导.
我听同学说常压下甲醇/水1:1洗脱效果不错,所以这次上的凝胶柱是在常压下跑的.我的师姐用中压跑过凝胶柱,效果不错,流速也能加快.
呵呵，好啊。共同进步啊。
我们实验事没有反向柱子，但是我分的东西大极性的很多，底下全是红色条，上面隐约有黄点，这样怎样能分离？
我们实验事没有反向柱子，但是我分的东西大极性的很多，底下全是红色条，上面隐约有黄点，这样怎样能分离？
飞扬跋扈为谁雄 感觉您在做大极性部位的分离经验很多啊，希望能得到您的赐教。
我发现在做反相柱时，样品溶解是一个很大的问题，我做的主要是苷类样品。上反相柱时用甲醇或者甲醇水溶解有点困难，基本上溶解体积都在500ml左右（柱子C18量为700g左右），这样上样体积很大；特别有的样品只能用甲醇溶解（洗脱剂为甲醇水＝5：5），这样无形中增大了开始上样时反相中的洗脱能力，使分离效果减弱；
希望能得到一些关于反相样品上柱时溶解方面的赐教，大家也可以讨论讨论啊。！
飞扬跋扈为谁雄 感觉您在做大极性部位的分离经验很多啊，希望能得到您的赐教。
我发现在做反相柱时，样品溶解是一个很大的问题，我做的主要是苷类样品。上反相柱时用甲醇或者甲醇水溶解有点困难，基本上溶解体积都在500ml左右（柱子C18量为700g左右），这样上样体积很大；特别有的样品只能用甲醇溶解（洗脱剂为甲醇水＝5：5），这样无形中增大了开始上样时反相中的洗脱能力，使分离效果减弱；
希望能得到一些关于反相样品上柱时溶解方面的赐教，大家也可以讨论讨论啊。！
我刚刚用氯仿：甲醇：水＝7：3：0.5展开的正丁醇部分，结果分离效果很好，你可以试试。
值得学习。
飞扬跋扈为谁雄 经验的分享
目前我也大部分是采用拟说得第二中方法上样的。但我自己心里始终有一个疑问，那就是 你说的 “慢慢沉降” 会形成目标样品成分在色谱柱中 “过长”，分离效果就会降低。您如何看待这个问题？
还有，一般C18柱过完一次样品后，做什么的处理才能彻底的除掉C18中残留的物质，我一般是用甲醇，丙酮处理；但是发现再过另一个样品时，会有些杂质峰产生，所以担心是上次过柱时C18清洗不干净而产生的。
大家可以讨论下如何清洗C18填料的问题，同时保证C18少受到污染和破坏！不胜赐教，！
可能是我说的不太清楚，一般只在混悬物漂浮在流动相中无法沉降，或是混悬物过多堵塞柱子时，才将反相柱上层硅胶轻轻搅起，并使其慢慢沉降。而且一般只搅起薄薄一层即可。其厚度略等同于正相柱干法上样的样品层高度，因此对分离效果影响不是太大。
另外，反相柱过完样品后，一般只需用甲醇冲洗几个柱体积就足够了。即使有少量残留物，也应该是些小极性色素类物质。由于我们的流动相不会是纯甲醇，因此再上下一个样品时，即使上次有少量残留，也应该不会和样品一起被冲下，不会对分离有太大影响。
！飞扬跋扈为谁雄
1. 大孔树脂柱分段。 水溶后上样，依次用水，30%、60%、95%乙醇溶液洗脱，分别合并、收集。一般说来目标化合物多在60%段，水，30%段多为一些水溶性单糖、二糖及多酚类化合物，可以考虑弃去。而95%部分多和乙酸乙酯部位大极性段重叠，可以乙酸乙酯部位合并处理。
其实，30％段还是有些东西的，我的正丁醇部位出现的一个点，在树脂的30％段富集，干扰还少。
俺现在做的也是正丁醇相的部分 ，首先用大孔树脂分段 再用ODS分 ，至于最后的细分 我觉的mci 的效果要比ods的好 而且流速比较快 （个人意见），至于上样过程 可以用dmso 溶解性很好
呵呵，是啊，MCI的分离效果也是不错的，只是没法摸条件，而ODS可以用HPLC和反相板来摸条件，会事半功倍一些。楼上用MCI上柱，有什么好的经验，可以来聊聊啊。