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请教一个关于糖类分离纯化的问题

时间: 2008-09-22 01:24:49 作者: 来源: 字号:
进行糖的分离纯化时,通常采用的凝胶柱是sepharose系列,当我请教别人应该用哪种型号的凝胶时,对方就会问,那你要先弄清楚你的糖的分子量大概是多少范围的。问题是我自己都搞不清楚我的目标物质分子量大概多大,我的粗品中,分子量大的可能大到淀粉那样,分子量小的可能小到葡萄糖那样,目标物质都不知道分子量如何,不知道版里的朋友有没有遇到过这样的问题? 你们研究糖的时候不可能一开始就知道你们的目标物到底是多糖,还是寡糖、甚至单糖的,那么,是用什么方法来确定的呢?

另:我自己是用乙醇分级沉淀的方法来尝试的,操作是这样:先把粗品配成50mg/ml的浓溶液,然后加无水乙醇,使得终浓度为50%,离心,保留沉淀并用50%乙醇洗涤,上清液取出再继续加无水乙醇,使得终浓度为70%,如此炮制,制得50%、70%、90%的沉淀,结果发现这三种沉淀都是有活性的,难以取舍。这样的操作方法对吗?还是我这个分级分的太粗?不同浓度的醇所对应的能沉淀下来的糖的大致分子量为多少啊?能被乙醇沉下来的物质,除了糖、糖苷还有别的物质吗?

还有一个问题是薄层层析,我印象中大家常用的显色剂是苯胺-邻苯二甲酸试剂,但这个显色剂的对象是还原糖,我想找一个能对所有糖类都能显色的试剂,请问有吗?一般展开糖类的流动相是正丁醇:乙酸:水系统,也有把正丁醇换成甲醇、乙酸乙脂的,那如果我的样品中大大小小的糖都有,展开效果岂不是很不好(一条线)?朋友们有没有遇到这种难题?或者说,你们根本不会拿含多种糖的样品来跑薄层?

先把我能想到的问题罗列在这里,对不起问题太多了,感觉很乱的样子,希望能得到高手相助!多谢多谢:)
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