我第一次做抗生素微生物检定法，查阅文献，确定用第一法 管碟法
查了不少的文献参考，还是有这么多的疑问啊：）
1、辅料的干扰，证明辅料无抑菌圈就可以吧。
2.线性，抑菌圈的直径或面积与log浓度的线性吗？
3.回收，需要做吗？要怎么做？
4.溶液稳定性，方法要快速测定，可以不用做吧。
5.双碟就是培养皿吧？
6.不锈钢小管（内径6.0mm±0.1mm，高10.0mm±0.1mm，外径7.8mm±0.1mm）、陶瓦圆盖。这东西哪儿有？
还有其他特别的需要注意的事项吗？
6.不锈钢小管（内径6.0mm±0.1mm，高10.0mm±0.1mm，外径7.8mm±0.1mm）、陶瓦圆盖。这东西哪儿有？
北京先驱威锋.
1、辅料的干扰，证明辅料无抑菌圈就可以吧。
－－应该可以的。
2.线性，抑菌圈的直径或面积与log浓度的线性吗？
－－我也是这样理解的。
3.回收，需要做吗？要怎么做？
4.溶液稳定性，方法要快速测定，可以不用做吧。
－－溶液稳定性还是要做的。一般效价方法比较慢的，不是很快啊。
5.双碟就是培养皿吧？
－－应该是的
6.不锈钢小管（内径6.0mm±0.1mm，高10.0mm±0.1mm，外径7.8mm±0.1mm）、陶瓦圆盖。这东西哪儿有？
－－可以在试剂公司买到。
两位啦：）
不过有知道：
1.抗生素微生物检定法回收率试验怎么做的吗？
也是和普通品种那样，三个浓度80％、100％、120％，每个浓度3个样品那样做吗？
2.试验时，不锈钢小管（内径6.0mm±0.1mm，高10.0mm±0.1mm，外径7.8mm±0.1mm）中加标准品溶液和供试品溶液，加多少呢？
譬如加1/3、1/2、2/3还是加满了？
我在查询过程中查到的，也贴上来给大家参考 一下：）
2007.4.23抗生素微生物检定法最新指导原则
抗生素微生物检定法是国际上通用的、经典的抗生素测定方法。自20世纪40年代建立至今，在各国药典中被普遍采用。虽然伴随着HPLC等化学分析技术的发展，一些抗生素品种的效价已被化学分析法所取代，但由于①微生物检定法可直观、特异地反映出抗生素品种的抗菌活性；②多组分抗生素由于结构与不同活性组分生物活性的差异，化学测定结果难以准确表征组分组成、含量和生物活性间的关系；③许多抗生素品种由于各种原因如无特征紫外吸收等，目前没有适当的化学分析方法表征其活性，故抗生素微生物检定法目前在各国药典中仍占有重要的地位，且短期内化学分析法不可能完全取代微生物检定法。中国药典2005年版仍采用抗生素微生物检定法中的管碟法测定其效价，目前申报已有国家标准的该类制剂较多，在质量研究中存在诸多问题，现就常见的问题加以分析，希望对注册申请人有所帮助。
一、方法的建立
1、 供试品与标准品的同质性 抗生素微生物检定法的原理以供试品与标准品同质为前提，方法建立前，首先应确定供试品与标准品是否同质，包括化学结构、所含组分及组分比例的一致性，对于制剂还要考虑辅料的影响是否造成供试品与标准品不同质。
2、培养基、试验菌、缓冲液和培养条件的选择
可参照中国药典建立，在此不再赘述。
3、检定方法的确定
可采用一剂量法（标准曲线法）、二剂量法及三剂量法等。一般确定线性与范围采用一剂量法（标准曲线法），常规含量测定采用二剂量法，标准品标定采用三剂量法。
4、抗生素溶液的稳定性
选定的品种可参照中国药典现行版附录抗生素微生物检定法的品种，若溶剂和缓冲液与其不同，应考察抗生素储备溶液和测定溶液在室温、40℃和不同pH值缓冲液中，以及放置不同时间的稳定性，以确定抗生素储备溶液和测定溶液的存放时间和条件。
二、方法的验证
验证的目的是证明采用的方法适合于检测的要求。
验证内容有：准确度、精密度（包括重复性、中间精密度）、专属性、适用性和线性。
在申报资料中常见的错误有：线性测定不符合抗生素微生物检定法一剂量中心浓度等比测定的原理；精密度的测定方法不正确；无专属性试验。下面就方法验证的内容与常见的错误加以简述。
1、专属性 考察杂质、辅料等对测定结果准确性的影响，可通过以下试验验证：
(1) 用辅料等替代抗生素进行试验，应不产生抑菌作用。
(2) 采用回收率试验进行验证，至少有9对以上数据，并进行显著性检验。
2、线性
线性系指在设计的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接呈正比关系的程度。做抗生素微生物检定法试验时，被测物浓度应转换为对数浓度。
管碟法中抗生素溶液浓度的对数值与抑菌圈直径或面积之间的关系在一定的浓度范围内，应呈线性关系。用一剂量法测定。
Ⅰ、测定方法
(1)确定直线中心点的抗生素浓度。中心点浓度C 0应使所致抑菌圈的直径在16～18mm。
(2) 线性测定的剂距一般用等比级数，可选用1:0.80、1:0.85或1:0.88等，稀释成适当的浓度系列。
(3)每个浓度为一组，至少设8组，一般每组3～5个双碟，每组双碟数m应相等。
(4)管碟法的线性考察，其直线的最低浓度端与最高浓度端的确定，应选择比所致抑菌圈直径在18～22mm高的浓度为最高浓度，即高浓度应涵盖能致抑菌圈直径在18～22mm的浓度。按中心浓度等比的关系，求算最低浓度。但最低浓度端应涵盖含量（效价）测定时高、低剂量之比为4：1的低剂量浓度。
(5)取制备好底层及菌层培养基的双碟，每3～5个双碟为一组，共分n组
理论弄清了，可是由于从来没有做过，
试验时，不锈钢小管（内径6.0mm±0.1mm，高10.0mm±0.1mm，外径7.8mm±0.1mm）中加标准品溶液和供试品溶液，加多少呢？
譬如加1/3、1/2、2/3还是加满了？
那位朋友知道呢？
加满，但要对着光线仔细观察液面与钢圈上端面相平，否则误差加大。
双碟是培养皿的俗称。钢圈买来要用游标卡尺测量验收，用前彻底洗净（其它用具一样）。
你自己没有做过很麻烦，估计误差会很大，建议去药检所学习一下。
哦，知道了，多谢了：）
那个我有办法控制，用1ml吸量管什么的辅助控制一下就可以吧：）
不过第一次做，肯定有些手忙脚乱的：）
加液操作时用前端细长（便于手控制）的滴管。
如果查到抗生素微生物检定法的验证资料，请共享。
volador，你是北京的单位工作吗？是否可以去你单位学习一下基本操作呢？
抗生素微生物检定法的验证资料，但国内对耐用性的验证还没有规定：）
抗生素微生物检定法方法学研究.htm (19.48k)
用较长的前端较细的胶头滴管加液，管里溶液只要是标准品的和样品的一样多就可以拉如果是机测的应该是标高、样高（在上面）标低、样低（下）顺序的，第一次加的时候手是很抖的注意不要碰倒拉小管，或者滴到管外面，
跟贴学习一下
多谢以上各位朋友的帮助：）
牛津管即不锈钢小管（内径6.0mm±0.1mm，高10.0mm±0.1mm，外径7.8mm±0.1mm）、陶瓦圆盖我买回来了：）
可是我想好好洗涤一下，那陶瓦圆盖怎么一碰水就大量冒泡阿？我象洗普通玻璃仪器那样，放到超声仪里，加水，加洗涤灵超声20分钟，然后取出用自来水、去离子水反复冲洗干净可以吗？
各位朋友再给我点建议哦：）
查了不少的文献参考，还是有这么多的疑问啊：）
1、辅料的干扰，证明辅料无抑菌圈就可以吧。
2.线性，抑菌圈的直径或面积与log浓度的线性吗？
3.回收，需要做吗？要怎么做？
4.溶液稳定性，方法要快速测定，可以不用做吧。
5.双碟就是培养皿吧？
6.不锈钢小管（内径6.0mm±0.1mm，高10.0mm±0.1mm，外径7.8mm±0.1mm）、陶瓦圆盖。这东西哪儿有？
还有其他特别的需要注意的事项吗？
6.不锈钢小管（内径6.0mm±0.1mm，高10.0mm±0.1mm，外径7.8mm±0.1mm）、陶瓦圆盖。这东西哪儿有？
北京先驱威锋.
1、辅料的干扰，证明辅料无抑菌圈就可以吧。
－－应该可以的。
2.线性，抑菌圈的直径或面积与log浓度的线性吗？
－－我也是这样理解的。
3.回收，需要做吗？要怎么做？
4.溶液稳定性，方法要快速测定，可以不用做吧。
－－溶液稳定性还是要做的。一般效价方法比较慢的，不是很快啊。
5.双碟就是培养皿吧？
－－应该是的
6.不锈钢小管（内径6.0mm±0.1mm，高10.0mm±0.1mm，外径7.8mm±0.1mm）、陶瓦圆盖。这东西哪儿有？
－－可以在试剂公司买到。
两位啦：）
不过有知道：
1.抗生素微生物检定法回收率试验怎么做的吗？
也是和普通品种那样，三个浓度80％、100％、120％，每个浓度3个样品那样做吗？
2.试验时，不锈钢小管（内径6.0mm±0.1mm，高10.0mm±0.1mm，外径7.8mm±0.1mm）中加标准品溶液和供试品溶液，加多少呢？
譬如加1/3、1/2、2/3还是加满了？
我在查询过程中查到的，也贴上来给大家参考 一下：）
2007.4.23抗生素微生物检定法最新指导原则
抗生素微生物检定法是国际上通用的、经典的抗生素测定方法。自20世纪40年代建立至今，在各国药典中被普遍采用。虽然伴随着HPLC等化学分析技术的发展，一些抗生素品种的效价已被化学分析法所取代，但由于①微生物检定法可直观、特异地反映出抗生素品种的抗菌活性；②多组分抗生素由于结构与不同活性组分生物活性的差异，化学测定结果难以准确表征组分组成、含量和生物活性间的关系；③许多抗生素品种由于各种原因如无特征紫外吸收等，目前没有适当的化学分析方法表征其活性，故抗生素微生物检定法目前在各国药典中仍占有重要的地位，且短期内化学分析法不可能完全取代微生物检定法。中国药典2005年版仍采用抗生素微生物检定法中的管碟法测定其效价，目前申报已有国家标准的该类制剂较多，在质量研究中存在诸多问题，现就常见的问题加以分析，希望对注册申请人有所帮助。
一、方法的建立
1、 供试品与标准品的同质性 抗生素微生物检定法的原理以供试品与标准品同质为前提，方法建立前，首先应确定供试品与标准品是否同质，包括化学结构、所含组分及组分比例的一致性，对于制剂还要考虑辅料的影响是否造成供试品与标准品不同质。
2、培养基、试验菌、缓冲液和培养条件的选择
可参照中国药典建立，在此不再赘述。
3、检定方法的确定
可采用一剂量法（标准曲线法）、二剂量法及三剂量法等。一般确定线性与范围采用一剂量法（标准曲线法），常规含量测定采用二剂量法，标准品标定采用三剂量法。
4、抗生素溶液的稳定性
选定的品种可参照中国药典现行版附录抗生素微生物检定法的品种，若溶剂和缓冲液与其不同，应考察抗生素储备溶液和测定溶液在室温、40℃和不同pH值缓冲液中，以及放置不同时间的稳定性，以确定抗生素储备溶液和测定溶液的存放时间和条件。
二、方法的验证
验证的目的是证明采用的方法适合于检测的要求。
验证内容有：准确度、精密度（包括重复性、中间精密度）、专属性、适用性和线性。
在申报资料中常见的错误有：线性测定不符合抗生素微生物检定法一剂量中心浓度等比测定的原理；精密度的测定方法不正确；无专属性试验。下面就方法验证的内容与常见的错误加以简述。
1、专属性 考察杂质、辅料等对测定结果准确性的影响，可通过以下试验验证：
(1) 用辅料等替代抗生素进行试验，应不产生抑菌作用。
(2) 采用回收率试验进行验证，至少有9对以上数据，并进行显著性检验。
2、线性
线性系指在设计的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接呈正比关系的程度。做抗生素微生物检定法试验时，被测物浓度应转换为对数浓度。
管碟法中抗生素溶液浓度的对数值与抑菌圈直径或面积之间的关系在一定的浓度范围内，应呈线性关系。用一剂量法测定。
Ⅰ、测定方法
(1)确定直线中心点的抗生素浓度。中心点浓度C 0应使所致抑菌圈的直径在16～18mm。
(2) 线性测定的剂距一般用等比级数，可选用1:0.80、1:0.85或1:0.88等，稀释成适当的浓度系列。
(3)每个浓度为一组，至少设8组，一般每组3～5个双碟，每组双碟数m应相等。
(4)管碟法的线性考察，其直线的最低浓度端与最高浓度端的确定，应选择比所致抑菌圈直径在18～22mm高的浓度为最高浓度，即高浓度应涵盖能致抑菌圈直径在18～22mm的浓度。按中心浓度等比的关系，求算最低浓度。但最低浓度端应涵盖含量（效价）测定时高、低剂量之比为4：1的低剂量浓度。
(5)取制备好底层及菌层培养基的双碟，每3～5个双碟为一组，共分n组
理论弄清了，可是由于从来没有做过，
试验时，不锈钢小管（内径6.0mm±0.1mm，高10.0mm±0.1mm，外径7.8mm±0.1mm）中加标准品溶液和供试品溶液，加多少呢？
譬如加1/3、1/2、2/3还是加满了？
那位朋友知道呢？
加满，但要对着光线仔细观察液面与钢圈上端面相平，否则误差加大。
双碟是培养皿的俗称。钢圈买来要用游标卡尺测量验收，用前彻底洗净（其它用具一样）。
你自己没有做过很麻烦，估计误差会很大，建议去药检所学习一下。
哦，知道了，多谢了：）
那个我有办法控制，用1ml吸量管什么的辅助控制一下就可以吧：）
不过第一次做，肯定有些手忙脚乱的：）
加液操作时用前端细长（便于手控制）的滴管。
如果查到抗生素微生物检定法的验证资料，请共享。
volador，你是北京的单位工作吗？是否可以去你单位学习一下基本操作呢？
抗生素微生物检定法的验证资料，但国内对耐用性的验证还没有规定：）
抗生素微生物检定法方法学研究.htm (19.48k)
用较长的前端较细的胶头滴管加液，管里溶液只要是标准品的和样品的一样多就可以拉如果是机测的应该是标高、样高（在上面）标低、样低（下）顺序的，第一次加的时候手是很抖的注意不要碰倒拉小管，或者滴到管外面，
跟贴学习一下
多谢以上各位朋友的帮助：）
牛津管即不锈钢小管（内径6.0mm±0.1mm，高10.0mm±0.1mm，外径7.8mm±0.1mm）、陶瓦圆盖我买回来了：）
可是我想好好洗涤一下，那陶瓦圆盖怎么一碰水就大量冒泡阿？我象洗普通玻璃仪器那样，放到超声仪里，加水，加洗涤灵超声20分钟，然后取出用自来水、去离子水反复冲洗干净可以吗？
各位朋友再给我点建议哦：）