请问做仿制药，TLC法的方法学研究都需做哪些内容？了！
1、有关物质，和HPLC法的内容一样，包括展开剂的选择、最小检出限、阴性干扰、破坏性试验、溶液稳定性、重复性实验等；
2、鉴别，主要就是展开剂的选择、阴性干扰以及重复性试验。
可以进行如下考察：
1、不同薄层板
2、不同湿度
3、不同温度
4、预平衡
5、预饱和
6、专属性
附：
广东省提高中成药质量标准指导原则和技术要求
（5）薄层色谱鉴别
应说明薄层色谱鉴别的药材名称，供试品、对照品、对照药材的具体制备方法，采用的薄层板、点样、展开剂、展开方式、显色、检视、注意事项和方法学验证中耐用性考察等内容，必要时应注明斑点的颜色和数量。
①供试品溶液制备
供试品溶液的制备应根据具体操作步骤，写明样品的取样量、提取溶剂和溶剂量、提取方式（超声、回流、萃取等），以及制成供试品溶液的浓度或体积等。如果采用其他项中的供试品溶液或滤液等作为该项的供试品溶液时，则不再重复叙述其制备方法，可写成“取〔鉴别〕（×）项下的供试品溶液作为供试品溶液”或“取××项下的××溶液作为供试品溶液”。若采用超声处理提取，则须注明超声仪的功率和频率。若采用柱层析分离，则须注明填料类型及目数、柱内径和柱高、柱预处理方法等。
②对照品（或对照药材）溶液制备
a对照品溶液制备
写明对照品的来源、批号、取样量、制备用溶剂、制备方法和制成对照品溶液的浓度或体积等。
b对照药材溶液制备
应按操作步骤叙述制备过程。如果具体操作同供试品溶液制备方法，可简写成“同法（系指同供试品溶液制备方法）制成对照药材溶液”；如果操作是从供试品溶液制备方法中的某个步骤起同法操作，应写成：自“……”起，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。
③薄层板的选择
a 可采用以下五种薄层板对样品和对照品或对照药材的色谱和分离效果进行比较试验。
●进口的MN（或MACKER）高效硅胶板；
●进口的普通硅胶板；
●国产高效硅胶板；
●国产普通硅胶板（或根据具体品种需要，选用聚酰胺或纤维素板）；
●自制手铺板：除特殊情况外，采用固定相粒度为10～50μm的硅胶G、以0.2%羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂，机械涂铺制备，保证均匀、平整和光滑。
b五种薄层板的规格一般为10cm×10cm或10cm×20cm，如所使用的薄层板需要特殊处理或化学改性的，可采用改性剂浸渍预制板，或与固定相混合铺制等方法制备。
c以上五类板，至少考察2种不同品牌的薄层板斑点的分离度和拖尾情况，预制板和自制板均可。并提供实验的照片。
d列出所选择的薄层板的商品名、规格和型号。
根据主斑点的分离度和拖尾情况的考察结果，最后选择的是进口的还是国产的预制板、是高效的还是一般的预制板或是自制手铺板；选择自制手铺板时，应注明固定相、黏合剂或其他改性剂的名称，及板的规格和涂布的厚度等，并作出评价。
④点样
a点样器和点样方式
●除特殊情况外，应采用专用毛细管、注射器，手动或配合相应的半自动、自动点样器点样；
●以圆点状或条带状方式点于薄层板上；
●圆点状点样，原点直径不得大于3mm，点间距离8～10mm；
●条带状点样，条带宽4～8mm，条带间距离不少于5mm。
●点样基线，普通板基线距底边10～15mm；高效板基线距底边8～10mm；左右边距均为12～15mm；
●以接触式还是以喷雾式点样；
b点样量(μl)
●高效板点样量一般为1～4μl；
●普通板点样量一般为2～6μl。
注明供试品溶液和对照品（对照药材）溶液的点样量，同时注明点样方式（是接触式还是喷雾式点样）。
c点样顺序
点样顺序从左至右分别为连续三批供试品、对照药材、对照品、阴性对照。
⑤展开
a展开剂
注明展开剂的溶剂名称、比例和用量，及必要的处理方式（如：需冰箱中放置过夜等）。
b展开缸
●一般采用密闭的双槽展开缸。
●记录是否采用适当方式预饱和或预平衡，并使用能保证分离效果的合适的预平衡或预饱和的条件进行展开。
c展开条件的耐用性考察
●采用同一种薄层板。分别在4℃～10℃（冰箱）、室温条件下展开，考察主斑点的分离度和拖尾情况；
●采用同一种薄层板，在环境相对湿度分别为低湿度（35％以下）和高湿度（75％）的条件下展开，考察主斑点的分离度和拖尾情况。
记录并使用能保证分离效果的合适的温度、相对湿度条件进行展开，并作出评价。
d展开方式
上行展开，薄层板浸入展开剂的深度一般为距原点5mm为宜。
e展距
除特殊需要外，高效预制板展距为5～8cm；普通预制板展矩为8cm；自制手铺板展矩为8～15cm。
⑥显色与检视
a直接在可见光下检视，或采用适宜显色剂显色（喷雾或浸渍）后在可见光下检视。
b在366nm紫外灯下检视荧光色谱，或采用适宜显色剂喷雾后检视荧光色谱。
c在254nm紫外灯下检视荧光淬灭色谱。
⑦色谱成像和记录
采用数码相机或数码摄像设备记录色谱图像，并存储为.bmp格式.jpg格式的文件。
⑧注意事项
a薄层试验中其它需要说明或解释的事项、存在的问题及应注意控制的操作条件，如：温度、相对湿度条件，以及温湿度调控的方法等，应在图谱的适当位置处加以说明。
b薄层图谱中不加注文字或符号，溶剂前沿和样品编号应标记在图像外空白处。图谱中应有三批供试品、对照药材、对照品和阴性对照。
可以进行如下考察：
1、不同薄层板
2、不同湿度
3、不同温度
4、预平衡
5、预饱和
6、专属性
附：
广东省提高中成药质量标准指导原则和技术要求
（5）薄层色谱鉴别
应说明薄层色谱鉴别的药材名称，供试品、对照品、对照药材的具体制备方法，采用的薄层板、点样、展开剂、展开方式、显色、检视、注意事项和方法学验证中耐用性考察等内容，必要时应注明斑点的颜色和数量。
①供试品溶液制备
供试品溶液的制备应根据具体操作步骤，写明样品的取样量、提取溶剂和溶剂量、提取方式（超声、回流、萃取等），以及制成供试品溶液的浓度或体积等。如果采用其他项中的供试品溶液或滤液等作为该项的供试品溶液时，则不再重复叙述其制备方法，可写成“取〔鉴别〕（×）项下的供试品溶液作为供试品溶液”或“取××项下的××溶液作为供试品溶液”。若采用超声处理提取，则须注明超声仪的功率和频率。若采用柱层析分离，则须注明填料类型及目数、柱内径和柱高、柱预处理方法等。
②对照品（或对照药材）溶液制备
a对照品溶液制备
写明对照品的来源、批号、取样量、制备用溶剂、制备方法和制成对照品溶液的浓度或体积等。
b对照药材溶液制备
应按操作步骤叙述制备过程。如果具体操作同供试品溶液制备方法，可简写成“同法（系指同供试品溶液制备方法）制成对照药材溶液”；如果操作是从供试品溶液制备方法中的某个步骤起同法操作，应写成：自“……”起，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。
③薄层板的选择
a 可采用以下五种薄层板对样品和对照品或对照药材的色谱和分离效果进行比较试验。
●进口的MN（或MACKER）高效硅胶板；
●进口的普通硅胶板；
●国产高效硅胶板；
●国产普通硅胶板（或根据具体品种需要，选用聚酰胺或纤维素板）；
●自制手铺板：除特殊情况外，采用固定相粒度为10～50μm的硅胶G、以0.2%羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂，机械涂铺制备，保证均匀、平整和光滑。
b五种薄层板的规格一般为10cm×10cm或10cm×20cm，如所使用的薄层板需要特殊处理或化学改性的，可采用改性剂浸渍预制板，或与固定相混合铺制等方法制备。
c以上五类板，至少考察2种不同品牌的薄层板斑点的分离度和拖尾情况，预制板和自制板均可。并提供实验的照片。
d列出所选择的薄层板的商品名、规格和型号。
根据主斑点的分离度和拖尾情况的考察结果，最后选择的是进口的还是国产的预制板、是高效的还是一般的预制板或是自制手铺板；选择自制手铺板时，应注明固定相、黏合剂或其他改性剂的名称，及板的规格和涂布的厚度等，并作出评价。
④点样
a点样器和点样方式
●除特殊情况外，应采用专用毛细管、注射器，手动或配合相应的半自动、自动点样器点样；
●以圆点状或条带状方式点于薄层板上；
●圆点状点样，原点直径不得大于3mm，点间距离8～10mm；
●条带状点样，条带宽4～8mm，条带间距离不少于5mm。
●点样基线，普通板基线距底边10～15mm；高效板基线距底边8～10mm；左右边距均为12～15mm；
●以接触式还是以喷雾式点样；
b点样量(μl)
●高效板点样量一般为1～4μl；
●普通板点样量一般为2～6μl。
注明供试品溶液和对照品（对照药材）溶液的点样量，同时注明点样方式（是接触式还是喷雾式点样）。
c点样顺序
点样顺序从左至右分别为连续三批供试品、对照药材、对照品、阴性对照。
⑤展开
a展开剂
注明展开剂的溶剂名称、比例和用量，及必要的处理方式（如：需冰箱中放置过夜等）。
b展开缸
●一般采用密闭的双槽展开缸。
●记录是否采用适当方式预饱和或预平衡，并使用能保证分离效果的合适的预平衡或预饱和的条件进行展开。
c展开条件的耐用性考察
●采用同一种薄层板。分别在4℃～10℃（冰箱）、室温条件下展开，考察主斑点的分离度和拖尾情况；
●采用同一种薄层板，在环境相对湿度分别为低湿度（35％以下）和高湿度（75％）的条件下展开，考察主斑点的分离度和拖尾情况。
记录并使用能保证分离效果的合适的温度、相对湿度条件进行展开，并作出评价。
d展开方式
上行展开，薄层板浸入展开剂的深度一般为距原点5mm为宜。
e展距
除特殊需要外，高效预制板展距为5～8cm；普通预制板展矩为8cm；自制手铺板展矩为8～15cm。
⑥显色与检视
a直接在可见光下检视，或采用适宜显色剂显色（喷雾或浸渍）后在可见光下检视。
b在366nm紫外灯下检视荧光色谱，或采用适宜显色剂喷雾后检视荧光色谱。
c在254nm紫外灯下检视荧光淬灭色谱。
⑦色谱成像和记录
采用数码相机或数码摄像设备记录色谱图像，并存储为.bmp格式.jpg格式的文件。
⑧注意事项
a薄层试验中其它需要说明或解释的事项、存在的问题及应注意控制的操作条件，如：温度、相对湿度条件，以及温湿度调控的方法等，应在图谱的适当位置处加以说明。
b薄层图谱中不加注文字或符号，溶剂前沿和样品编号应标记在图像外空白处。图谱中应有三批供试品、对照药材、对照品和阴性对照。
说的不是很明确，不知TLC用于那个项目，因此汇总一下上面各位战友所说的。
单从来看，参考药典附录其包括：专属性、准确度、精密度、检测限、定量限、线性、范围、耐用性；其中每一项的操作参考wangw_q战友的内容。
（1）TLC鉴别：主要是专属性和耐用性。对于已有的鉴别如楼上jxlts战友所言主要做一下专属性考察，看看阴性有无干扰即可，还有可能微调一下展开剂。对于新增的鉴别，也主要是专属性考察，只不过其中所作的工作挺多，如板的选择、展开剂的选择、显色条件的选择。
目前耐用性做的不多。
（2）有关物质检查：专属性、检测限、耐用性
专属性中除了阴性干扰之外，对于未知杂质还有破坏性试验。
（3）含量测定：专属性（阴性干扰）、精密度（同板精密度、异板精密度、重复性）、准确度（加样回收率）、线性、范围、耐用性（溶液稳定性，不同板的比较，不同展开条件），另外需要说明的是，同一个样品一般多要点几个（4个），而且注意点样的位置，一般和对照交叉开来。
我觉得TLC的灵敏度试验、分离度试验和破坏性试验也很重要
1、有关物质，和HPLC法的内容一样，包括展开剂的选择、最小检出限、阴性干扰、破坏性试验、溶液稳定性、重复性实验等；
2、鉴别，主要就是展开剂的选择、阴性干扰以及重复性试验。
可以进行如下考察：
1、不同薄层板
2、不同湿度
3、不同温度
4、预平衡
5、预饱和
6、专属性
附：
广东省提高中成药质量标准指导原则和技术要求
（5）薄层色谱鉴别
应说明薄层色谱鉴别的药材名称，供试品、对照品、对照药材的具体制备方法，采用的薄层板、点样、展开剂、展开方式、显色、检视、注意事项和方法学验证中耐用性考察等内容，必要时应注明斑点的颜色和数量。
①供试品溶液制备
供试品溶液的制备应根据具体操作步骤，写明样品的取样量、提取溶剂和溶剂量、提取方式（超声、回流、萃取等），以及制成供试品溶液的浓度或体积等。如果采用其他项中的供试品溶液或滤液等作为该项的供试品溶液时，则不再重复叙述其制备方法，可写成“取〔鉴别〕（×）项下的供试品溶液作为供试品溶液”或“取××项下的××溶液作为供试品溶液”。若采用超声处理提取，则须注明超声仪的功率和频率。若采用柱层析分离，则须注明填料类型及目数、柱内径和柱高、柱预处理方法等。
②对照品（或对照药材）溶液制备
a对照品溶液制备
写明对照品的来源、批号、取样量、制备用溶剂、制备方法和制成对照品溶液的浓度或体积等。
b对照药材溶液制备
应按操作步骤叙述制备过程。如果具体操作同供试品溶液制备方法，可简写成“同法（系指同供试品溶液制备方法）制成对照药材溶液”；如果操作是从供试品溶液制备方法中的某个步骤起同法操作，应写成：自“……”起，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。
③薄层板的选择
a 可采用以下五种薄层板对样品和对照品或对照药材的色谱和分离效果进行比较试验。
●进口的MN（或MACKER）高效硅胶板；
●进口的普通硅胶板；
●国产高效硅胶板；
●国产普通硅胶板（或根据具体品种需要，选用聚酰胺或纤维素板）；
●自制手铺板：除特殊情况外，采用固定相粒度为10～50μm的硅胶G、以0.2%羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂，机械涂铺制备，保证均匀、平整和光滑。
b五种薄层板的规格一般为10cm×10cm或10cm×20cm，如所使用的薄层板需要特殊处理或化学改性的，可采用改性剂浸渍预制板，或与固定相混合铺制等方法制备。
c以上五类板，至少考察2种不同品牌的薄层板斑点的分离度和拖尾情况，预制板和自制板均可。并提供实验的照片。
d列出所选择的薄层板的商品名、规格和型号。
根据主斑点的分离度和拖尾情况的考察结果，最后选择的是进口的还是国产的预制板、是高效的还是一般的预制板或是自制手铺板；选择自制手铺板时，应注明固定相、黏合剂或其他改性剂的名称，及板的规格和涂布的厚度等，并作出评价。
④点样
a点样器和点样方式
●除特殊情况外，应采用专用毛细管、注射器，手动或配合相应的半自动、自动点样器点样；
●以圆点状或条带状方式点于薄层板上；
●圆点状点样，原点直径不得大于3mm，点间距离8～10mm；
●条带状点样，条带宽4～8mm，条带间距离不少于5mm。
●点样基线，普通板基线距底边10～15mm；高效板基线距底边8～10mm；左右边距均为12～15mm；
●以接触式还是以喷雾式点样；
b点样量(μl)
●高效板点样量一般为1～4μl；
●普通板点样量一般为2～6μl。
注明供试品溶液和对照品（对照药材）溶液的点样量，同时注明点样方式（是接触式还是喷雾式点样）。
c点样顺序
点样顺序从左至右分别为连续三批供试品、对照药材、对照品、阴性对照。
⑤展开
a展开剂
注明展开剂的溶剂名称、比例和用量，及必要的处理方式（如：需冰箱中放置过夜等）。
b展开缸
●一般采用密闭的双槽展开缸。
●记录是否采用适当方式预饱和或预平衡，并使用能保证分离效果的合适的预平衡或预饱和的条件进行展开。
c展开条件的耐用性考察
●采用同一种薄层板。分别在4℃～10℃（冰箱）、室温条件下展开，考察主斑点的分离度和拖尾情况；
●采用同一种薄层板，在环境相对湿度分别为低湿度（35％以下）和高湿度（75％）的条件下展开，考察主斑点的分离度和拖尾情况。
记录并使用能保证分离效果的合适的温度、相对湿度条件进行展开，并作出评价。
d展开方式
上行展开，薄层板浸入展开剂的深度一般为距原点5mm为宜。
e展距
除特殊需要外，高效预制板展距为5～8cm；普通预制板展矩为8cm；自制手铺板展矩为8～15cm。
⑥显色与检视
a直接在可见光下检视，或采用适宜显色剂显色（喷雾或浸渍）后在可见光下检视。
b在366nm紫外灯下检视荧光色谱，或采用适宜显色剂喷雾后检视荧光色谱。
c在254nm紫外灯下检视荧光淬灭色谱。
⑦色谱成像和记录
采用数码相机或数码摄像设备记录色谱图像，并存储为.bmp格式.jpg格式的文件。
⑧注意事项
a薄层试验中其它需要说明或解释的事项、存在的问题及应注意控制的操作条件，如：温度、相对湿度条件，以及温湿度调控的方法等，应在图谱的适当位置处加以说明。
b薄层图谱中不加注文字或符号，溶剂前沿和样品编号应标记在图像外空白处。图谱中应有三批供试品、对照药材、对照品和阴性对照。
可以进行如下考察：
1、不同薄层板
2、不同湿度
3、不同温度
4、预平衡
5、预饱和
6、专属性
附：
广东省提高中成药质量标准指导原则和技术要求
（5）薄层色谱鉴别
应说明薄层色谱鉴别的药材名称，供试品、对照品、对照药材的具体制备方法，采用的薄层板、点样、展开剂、展开方式、显色、检视、注意事项和方法学验证中耐用性考察等内容，必要时应注明斑点的颜色和数量。
①供试品溶液制备
供试品溶液的制备应根据具体操作步骤，写明样品的取样量、提取溶剂和溶剂量、提取方式（超声、回流、萃取等），以及制成供试品溶液的浓度或体积等。如果采用其他项中的供试品溶液或滤液等作为该项的供试品溶液时，则不再重复叙述其制备方法，可写成“取〔鉴别〕（×）项下的供试品溶液作为供试品溶液”或“取××项下的××溶液作为供试品溶液”。若采用超声处理提取，则须注明超声仪的功率和频率。若采用柱层析分离，则须注明填料类型及目数、柱内径和柱高、柱预处理方法等。
②对照品（或对照药材）溶液制备
a对照品溶液制备
写明对照品的来源、批号、取样量、制备用溶剂、制备方法和制成对照品溶液的浓度或体积等。
b对照药材溶液制备
应按操作步骤叙述制备过程。如果具体操作同供试品溶液制备方法，可简写成“同法（系指同供试品溶液制备方法）制成对照药材溶液”；如果操作是从供试品溶液制备方法中的某个步骤起同法操作，应写成：自“……”起，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。
③薄层板的选择
a 可采用以下五种薄层板对样品和对照品或对照药材的色谱和分离效果进行比较试验。
●进口的MN（或MACKER）高效硅胶板；
●进口的普通硅胶板；
●国产高效硅胶板；
●国产普通硅胶板（或根据具体品种需要，选用聚酰胺或纤维素板）；
●自制手铺板：除特殊情况外，采用固定相粒度为10～50μm的硅胶G、以0.2%羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂，机械涂铺制备，保证均匀、平整和光滑。
b五种薄层板的规格一般为10cm×10cm或10cm×20cm，如所使用的薄层板需要特殊处理或化学改性的，可采用改性剂浸渍预制板，或与固定相混合铺制等方法制备。
c以上五类板，至少考察2种不同品牌的薄层板斑点的分离度和拖尾情况，预制板和自制板均可。并提供实验的照片。
d列出所选择的薄层板的商品名、规格和型号。
根据主斑点的分离度和拖尾情况的考察结果，最后选择的是进口的还是国产的预制板、是高效的还是一般的预制板或是自制手铺板；选择自制手铺板时，应注明固定相、黏合剂或其他改性剂的名称，及板的规格和涂布的厚度等，并作出评价。
④点样
a点样器和点样方式
●除特殊情况外，应采用专用毛细管、注射器，手动或配合相应的半自动、自动点样器点样；
●以圆点状或条带状方式点于薄层板上；
●圆点状点样，原点直径不得大于3mm，点间距离8～10mm；
●条带状点样，条带宽4～8mm，条带间距离不少于5mm。
●点样基线，普通板基线距底边10～15mm；高效板基线距底边8～10mm；左右边距均为12～15mm；
●以接触式还是以喷雾式点样；
b点样量(μl)
●高效板点样量一般为1～4μl；
●普通板点样量一般为2～6μl。
注明供试品溶液和对照品（对照药材）溶液的点样量，同时注明点样方式（是接触式还是喷雾式点样）。
c点样顺序
点样顺序从左至右分别为连续三批供试品、对照药材、对照品、阴性对照。
⑤展开
a展开剂
注明展开剂的溶剂名称、比例和用量，及必要的处理方式（如：需冰箱中放置过夜等）。
b展开缸
●一般采用密闭的双槽展开缸。
●记录是否采用适当方式预饱和或预平衡，并使用能保证分离效果的合适的预平衡或预饱和的条件进行展开。
c展开条件的耐用性考察
●采用同一种薄层板。分别在4℃～10℃（冰箱）、室温条件下展开，考察主斑点的分离度和拖尾情况；
●采用同一种薄层板，在环境相对湿度分别为低湿度（35％以下）和高湿度（75％）的条件下展开，考察主斑点的分离度和拖尾情况。
记录并使用能保证分离效果的合适的温度、相对湿度条件进行展开，并作出评价。
d展开方式
上行展开，薄层板浸入展开剂的深度一般为距原点5mm为宜。
e展距
除特殊需要外，高效预制板展距为5～8cm；普通预制板展矩为8cm；自制手铺板展矩为8～15cm。
⑥显色与检视
a直接在可见光下检视，或采用适宜显色剂显色（喷雾或浸渍）后在可见光下检视。
b在366nm紫外灯下检视荧光色谱，或采用适宜显色剂喷雾后检视荧光色谱。
c在254nm紫外灯下检视荧光淬灭色谱。
⑦色谱成像和记录
采用数码相机或数码摄像设备记录色谱图像，并存储为.bmp格式.jpg格式的文件。
⑧注意事项
a薄层试验中其它需要说明或解释的事项、存在的问题及应注意控制的操作条件，如：温度、相对湿度条件，以及温湿度调控的方法等，应在图谱的适当位置处加以说明。
b薄层图谱中不加注文字或符号，溶剂前沿和样品编号应标记在图像外空白处。图谱中应有三批供试品、对照药材、对照品和阴性对照。
说的不是很明确，不知TLC用于那个项目，因此汇总一下上面各位战友所说的。
单从来看，参考药典附录其包括：专属性、准确度、精密度、检测限、定量限、线性、范围、耐用性；其中每一项的操作参考wangw_q战友的内容。
（1）TLC鉴别：主要是专属性和耐用性。对于已有的鉴别如楼上jxlts战友所言主要做一下专属性考察，看看阴性有无干扰即可，还有可能微调一下展开剂。对于新增的鉴别，也主要是专属性考察，只不过其中所作的工作挺多，如板的选择、展开剂的选择、显色条件的选择。
目前耐用性做的不多。
（2）有关物质检查：专属性、检测限、耐用性
专属性中除了阴性干扰之外，对于未知杂质还有破坏性试验。
（3）含量测定：专属性（阴性干扰）、精密度（同板精密度、异板精密度、重复性）、准确度（加样回收率）、线性、范围、耐用性（溶液稳定性，不同板的比较，不同展开条件），另外需要说明的是，同一个样品一般多要点几个（4个），而且注意点样的位置，一般和对照交叉开来。
我觉得TLC的灵敏度试验、分离度试验和破坏性试验也很重要