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反相C18柱的展开剂怎么确定恩?

时间: 2008-09-25 02:11:05 作者: 来源: 字号:
看园子里反相C18柱洗脱多是甲醇水梯度洗脱,我的药物水溶性很好,而且用乙醇:水=5:1再正相硅胶板上展开效果很明显,可以看见几个点?那我使用乙醇水梯度洗脱还是用甲醇水梯度洗脱,展开剂我该如何确定呢?指教,没有用过ODS
用乙醇:水=5:1是应该在反相板上展开的吧?用甲醇:水或乙醇:水应该都可以。但是一般都用甲醇:水的。关于比例,醇部分的量比反相板展开剂的用量少一些就可以了。
你的样品可溶于水,就用少量水溶解样品上ODS柱,再用配好的洗脱剂洗脱。配好的洗脱剂最好是先超声除去气泡,用有机膜过滤一下,再用来柱层析。
用乙醇:水=5:1是在正向板上展开的,那我该怎么确定洗脱的甲醇:水的量呢?是恒定洗脱还是梯度洗脱好呢?我跟踪检测是正相硅胶板可以吗?
反相硅胶柱层析的洗脱剂的选择方法主要有两种 :1.根据液相条件来确定。因为自己装得反相硅胶柱没有液相的柱子装的紧密,另外自己装得柱子的反相硅胶颗粒一般为35-50um,这个粒度要比液相的柱子的填料要大。因此你可以将你的液相流动相中的有机相减小10%,也就是将极性调大10%就可以了。2.根据反相板来确定。根据反相板的展开剂来确定反相硅胶洗脱剂。
现在你是用正相板跑得,我觉得你最好炮一下液相或者用反相板跑一下。当然反相柱层析是可以用乙醇的,并且乙醇相对甲醇的毒性还小一些。你可以恒定洗脱也可以剃度洗脱。至于跟踪监测,我们一般是用正相板跟踪,毕竟反相板比较贵。祝你好运!
问下,用正相板跟踪的展开剂使用哪个展开剂的呢?没有用过反相硅胶,请教下经验。还想问问一下爱几个问题:
1、反相硅胶装柱子后是不是也要沉降一晚上第二天再上样呢?
2、我的样品水溶性好是不是水溶解后久直接上液体呢?
3、收集的时候要是几毫升收集浓缩的时候怎么避免损耗呢?

问下,用正相板跟踪的展开剂使用哪个展开剂的呢?没有用过反相硅胶,请教下经验。还想问问一下爱几个问题:
1、反相硅胶装柱子后是不是也要沉降一晚上第二天再上样呢?
2、我的样品水溶性好是不是水溶解后久直接上液体呢?
3、收集的时候要是几毫升收集浓缩的时候怎么避免损耗呢?

用反相展开,最好用反相板来摸条件,正相板的结果只能说明其极性大小,而且反相板可以重复用多次,试过的条件很容易放到反相柱上验证。

反相柱的装填一般用甲醇装柱,有条件的话可以尽可能的在高流速下压一下柱床,这样柱效好一些。
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