葡聚糖凝胶LH20用甲醇装柱后,在柱子中保存时,甲醇流干了,应该不会对凝胶产生什么不好的影响吧!下次再用时,再用甲醇重新溶胀就行了吧!另外样品颜色很深,过了凝胶后,用甲醇冲了很久,还是有颜色,这样的凝胶还能变成白的吗?要怎么样处理呢?
用DMSO洗柱,一般能变白
干了就用甲醇浸泡久点,不成就煮沸。
有颜色的话用0.1M的NaOH洗一下就白了,很经典的作法。
用2-3个洗脱液洗下
用DMSO洗柱,一般能变白
将样品上了聚酰胺柱,用不同的浓度的乙醇洗脱,最后用95%的乙醇洗了之后,感觉还有很多东西没有洗脱下来,而且洗下来的流分也很少,损失很严重,打算再换成丙酮洗,想请教下是直接用纯丙酮洗,还是用丙酮与水不同比例混合洗脱呢?
DMSO对凝胶的影响大吗?
会不会把凝胶溶掉啊,
估计不太懂的会用LH-20吧,凝胶是用来分少量\比较纯的样品的,上样前样品在常温下溶解于甲醇中,否则会影响分离效果,还会污染柱子.我一根凝胶柱用了三年,重装过几次,可颜色照样很白.柱子干了建议重装.
yinrj,你好。LH-20是用甲醇装柱的,但是分离样品时,是不是要用氯仿甲醇混合溶剂来洗脱啊,样品是不是也要溶于氯仿甲醇啊。
不同的溶剂LH20的溶涨系数不同,一般不建议换洗脱液。尤其是从容张系数小得换到大的。LH20常用洗脱液中,丙酮的溶涨最小,氯仿最大,甲醇和水差不多,所以可以用甲醇水梯度洗脱,或者从氯仿甲醇梯度到甲醇。而且LH20用一段时间后最好重装一下,尤其是长柱子。
bmwchinasdjn :你好,原则上是用什么装的柱就用什么溶剂溶解.洗脱过程也很少换极性,一般是等梯度洗脱,因为不太好控制,而且其分离原理主要是根据分子量大小的差异,其他因素非主要因素.如果样品不好溶,可考虑稍微加点其他的溶剂.氯仿-甲醇=1:1的混合溶剂溶解力强,能溶解的样品极性范围广,用的较多.如果是极性大的,可考虑用甲醇,水,或含水醇装柱洗脱.
补充:没见过用甲醇装柱,用氯仿-甲醇洗柱的;实验室以前用氯仿-甲醇=1:1,甲醇装柱的常见.
用DMSO洗应该可以的,我们常用。
氯仿-甲醇1:1可以洗的,不过一般用氯仿甲醇泡过以后,倒去上清,再用纯甲醇置换回来,多置换几次,就可以了。
凝胶柱一般都是快分纯的时候用的,如果你的东西颜色很深的话,用也可以,不过过完柱子色素如果很多而且染柱子的话,一定要洗一下。
另外,上凝胶柱的东西一定要过滤,以免不溶物堵塞柱子。
装凝胶时有了气泡,会影响分离效果吗?用溶剂冲一段时间气泡会消失吗?急!急!急!
估计不太懂的会用LH-20吧,凝胶是用来分少量\比较纯的样品的,上样前样品在常温下溶解于甲醇中,否则会影响分离效果,还会污染柱子.我一根凝胶柱用了三年,重装过几次,可颜色照样很白.柱子干了建议重装.
样品上了凝胶之后,用甲醇洗了五个柱体积,但整根柱子都带黄色,最下面有黄绿色,怎么用甲醇洗都没有改变,还有没有必要继续用甲醇洗呀?而且收集的流分好像没有什么东西,东西不知道去哪里了!
以下是一些LH-20的使用原则,请各位补充吧
装柱:第一步洗脱用什么溶剂,就用什么溶剂装柱,否则容易柱床塌陷或者膨胀。不同溶剂的溶胀系数可以查到,对比一下就知道了。气泡不能有,这个是所有填料装填的大忌。
洗脱:洗脱溶剂可以使用的范围非常宽,甲醇,水,丙酮,乙酸乙酯,氯仿,都可以用。具体的例子在慧德易提供的电子期刊里面连载了5期,可以找他们要了看看。
再生:如果颜色很深,并且颜色是由叶绿素一类脂溶性色素造成,可以用丙酮洗,只不过洗完估计要重新装柱。另外也可以用0.5M的NaOH洗,一般都会很白的。
把dmso当样品上样一样多洗两次,会有效果的
用DMSO洗柱,一般能变白
干了就用甲醇浸泡久点,不成就煮沸。
有颜色的话用0.1M的NaOH洗一下就白了,很经典的作法。
用2-3个洗脱液洗下
用DMSO洗柱,一般能变白
将样品上了聚酰胺柱,用不同的浓度的乙醇洗脱,最后用95%的乙醇洗了之后,感觉还有很多东西没有洗脱下来,而且洗下来的流分也很少,损失很严重,打算再换成丙酮洗,想请教下是直接用纯丙酮洗,还是用丙酮与水不同比例混合洗脱呢?
DMSO对凝胶的影响大吗?
会不会把凝胶溶掉啊,
估计不太懂的会用LH-20吧,凝胶是用来分少量\比较纯的样品的,上样前样品在常温下溶解于甲醇中,否则会影响分离效果,还会污染柱子.我一根凝胶柱用了三年,重装过几次,可颜色照样很白.柱子干了建议重装.
yinrj,你好。LH-20是用甲醇装柱的,但是分离样品时,是不是要用氯仿甲醇混合溶剂来洗脱啊,样品是不是也要溶于氯仿甲醇啊。
不同的溶剂LH20的溶涨系数不同,一般不建议换洗脱液。尤其是从容张系数小得换到大的。LH20常用洗脱液中,丙酮的溶涨最小,氯仿最大,甲醇和水差不多,所以可以用甲醇水梯度洗脱,或者从氯仿甲醇梯度到甲醇。而且LH20用一段时间后最好重装一下,尤其是长柱子。
bmwchinasdjn :你好,原则上是用什么装的柱就用什么溶剂溶解.洗脱过程也很少换极性,一般是等梯度洗脱,因为不太好控制,而且其分离原理主要是根据分子量大小的差异,其他因素非主要因素.如果样品不好溶,可考虑稍微加点其他的溶剂.氯仿-甲醇=1:1的混合溶剂溶解力强,能溶解的样品极性范围广,用的较多.如果是极性大的,可考虑用甲醇,水,或含水醇装柱洗脱.
补充:没见过用甲醇装柱,用氯仿-甲醇洗柱的;实验室以前用氯仿-甲醇=1:1,甲醇装柱的常见.
用DMSO洗应该可以的,我们常用。
氯仿-甲醇1:1可以洗的,不过一般用氯仿甲醇泡过以后,倒去上清,再用纯甲醇置换回来,多置换几次,就可以了。
凝胶柱一般都是快分纯的时候用的,如果你的东西颜色很深的话,用也可以,不过过完柱子色素如果很多而且染柱子的话,一定要洗一下。
另外,上凝胶柱的东西一定要过滤,以免不溶物堵塞柱子。
装凝胶时有了气泡,会影响分离效果吗?用溶剂冲一段时间气泡会消失吗?急!急!急!
估计不太懂的会用LH-20吧,凝胶是用来分少量\比较纯的样品的,上样前样品在常温下溶解于甲醇中,否则会影响分离效果,还会污染柱子.我一根凝胶柱用了三年,重装过几次,可颜色照样很白.柱子干了建议重装.
样品上了凝胶之后,用甲醇洗了五个柱体积,但整根柱子都带黄色,最下面有黄绿色,怎么用甲醇洗都没有改变,还有没有必要继续用甲醇洗呀?而且收集的流分好像没有什么东西,东西不知道去哪里了!
以下是一些LH-20的使用原则,请各位补充吧
装柱:第一步洗脱用什么溶剂,就用什么溶剂装柱,否则容易柱床塌陷或者膨胀。不同溶剂的溶胀系数可以查到,对比一下就知道了。气泡不能有,这个是所有填料装填的大忌。
洗脱:洗脱溶剂可以使用的范围非常宽,甲醇,水,丙酮,乙酸乙酯,氯仿,都可以用。具体的例子在慧德易提供的电子期刊里面连载了5期,可以找他们要了看看。
再生:如果颜色很深,并且颜色是由叶绿素一类脂溶性色素造成,可以用丙酮洗,只不过洗完估计要重新装柱。另外也可以用0.5M的NaOH洗,一般都会很白的。
把dmso当样品上样一样多洗两次,会有效果的