今天过一个组分,氯仿装柱,上样后,流速减低,加压后仍不见改善,后求助同学.
一说:之前也遇到过,第一天缓慢流,增大极性后,流速逐渐增大,
又有说:增大极性或是将样品层搅起来,再常压过,
我都试验了一下.
想问的是:
为什么柱子会堵呢?
是黏性太大,加硅胶的量不够,致使吸附的不好,堵了,还是其他什么原因?
请各位高手指点
这种情况可能有几种原因:
1.拌样硅胶加少了,这样样品就会比较粘,容易堵柱子,一般样品和拌样硅胶1:2-3
2.可能你用的硅胶太细了,我们冲柱子都是用200-300目的硅胶,拌样用100-200目的.太细流速会很慢!如果样品还比较粘稠,更容易堵。
3.装柱溶剂极性过大或更换比例时极性梯度相差过大,.小极性并且粘度大的东西很快就冲出来,容易把柱子堵了.
此时可以把硅胶挖出来用大极性的甚至甲醇洗,再过滤几乎回收全部样品,然后再重新装柱。 然后加大了拌样的硅胶,可能就不会出现这样的问题!
mltx2006的指导.
我平时拌样是1:1,这次怕加样层太厚,特别把硅胶的量降低,小于1:1,这可能是主要原因.
冲柱子是用的细分硅胶200-300目的,
极性跨度是氯仿到氯仿甲醇50:1,
下次遇到问题应该有数了,
拌样上柱,硅胶和样品的比例一般是1:1,但是有时候就是硅胶的量尽量少,只要拌匀了就可以了,估计是硅胶和溶剂梯度的缘故吧
一说:之前也遇到过,第一天缓慢流,增大极性后,流速逐渐增大,
又有说:增大极性或是将样品层搅起来,再常压过,
我都试验了一下.
想问的是:
为什么柱子会堵呢?
是黏性太大,加硅胶的量不够,致使吸附的不好,堵了,还是其他什么原因?
请各位高手指点
这种情况可能有几种原因:
1.拌样硅胶加少了,这样样品就会比较粘,容易堵柱子,一般样品和拌样硅胶1:2-3
2.可能你用的硅胶太细了,我们冲柱子都是用200-300目的硅胶,拌样用100-200目的.太细流速会很慢!如果样品还比较粘稠,更容易堵。
3.装柱溶剂极性过大或更换比例时极性梯度相差过大,.小极性并且粘度大的东西很快就冲出来,容易把柱子堵了.
此时可以把硅胶挖出来用大极性的甚至甲醇洗,再过滤几乎回收全部样品,然后再重新装柱。 然后加大了拌样的硅胶,可能就不会出现这样的问题!
mltx2006的指导.
我平时拌样是1:1,这次怕加样层太厚,特别把硅胶的量降低,小于1:1,这可能是主要原因.
冲柱子是用的细分硅胶200-300目的,
极性跨度是氯仿到氯仿甲醇50:1,
下次遇到问题应该有数了,
拌样上柱,硅胶和样品的比例一般是1:1,但是有时候就是硅胶的量尽量少,只要拌匀了就可以了,估计是硅胶和溶剂梯度的缘故吧