各位园子里的大师,朋友们好:
我是刚刚进入实验室的植化研究生,经过一段时间才发现,做植化的难度除了最后的解谱,唯一使我困惑可能要数如何优化洗脱条件是最大的.由于刚开始都是师兄师姐传授经验,但一旦自己亲自动手就发现有很多问题!一些经验不清楚其中的原理!
所以想借园子里这一方宝地,和各位园友讨论一下如何用薄层板来摸柱色谱的洗脱条件?例如可以分两个方面,正相柱和反相柱都分别怎样控制薄层板的RF值,才能使分离效果达到最好?
希望各位大师园友能提供你们宝贵的经验,感激不尽!
我们过柱子的经验是:
1.正相硅胶柱:一般柱色谱的洗脱剂要使你要得点在 TLC上Rf 值为0.2-0.3,最好你要得点与杂点的Rf值能相差0.1,这样的展开剂可用来作为柱色谱洗脱剂,这样分离效果应该比较好.
2.反相柱:我过的反相柱是反相MCI，所用的洗脱剂条件是按照HPLC的流动相条件来摸索的。由于自己 装得反相MCI柱，没有HPLc的柱子装的紧密，且颗粒相对较大（我用的是50um），所以柱效肯定没有HPLC的好，所以为了达到好的分离效果我的反相柱洗脱剂将HPLC的流动相的有机溶剂减小了10％，分离效果比较好。
至于反相 C18柱我没有过过，网上的网友说可以通过点反相板来确定洗脱剂，应该和正相柱的选择差不多，你可以在园子里搜索一下，又很多资料。
具体操作要根据你的物质条件有关，可以通过几次调整来找到最好的洗脱剂，祝你好运！
我们过柱子的经验是:
1.正相硅胶柱:一般柱色谱的洗脱剂要使你要得点在 TLC上Rf 值为0.2-0.3,最好你要得点与杂点的Rf值能相差0.1,这样的展开剂可用来作为柱色谱洗脱剂,这样分离效果应该比较好.
2.反相柱:我过的反相柱是反相MCI，所用的洗脱剂条件是按照HPLC的流动相条件来摸索的。由于自己 装得反相MCI柱，没有HPLc的柱子装的紧密，且颗粒相对较大（我用的是50um），所以柱效肯定没有HPLC的好，所以为了达到好的分离效果我的反相柱洗脱剂将HPLC的流动相的有机溶剂减小了10％，分离效果比较好。
至于反相 C18柱我没有过过，网上的网友说可以通过点反相板来确定洗脱剂，应该和正相柱的选择差不多，你可以在园子里搜索一下，又很多资料。
具体操作要根据你的物质条件有关，可以通过几次调整来找到最好的洗脱剂，祝你好运！
我师兄的经验就是 :柱层析关键在于柱子是否装好和淋洗剂是否选择恰当。而淋洗剂的选择则是通过TLC确定。这里要指出的一点是：TLC的作用除了跟踪反应进程，检测试剂和原料纯度外，一个重要的用途就是为柱层析选择适当的淋洗剂。
上样完毕后，接着即用淋洗剂淋洗。淋洗剂一般采用TLC分析得到的展开剂的比例再稀释一倍后的溶剂。由于层析柱和薄板的不同，即使两者使用的硅胶都相同，但是在把TLC分析得到的展开剂用在柱层析时，也显得极性偏大，所以要稀释一倍，但又不能稀 释太多，否则成了靠扩散作用来分离，效果也不会好。
希望大家踊跃讨论,使大家在以后的实验中能少走弯路!
就这个经验其实我想请问几个问题：
1.一般淋洗剂是采用TLC分析得到的展开剂的比例再稀释一倍后的溶剂（此时目标产物值大致在0.3左右）。这句话怎么理解，能不能举个例子来说一下。
2.展开剂的极性太小，点分不开，极性太大，也分不开.一般以目标产物的Rf值在0.22左右为最佳。调到0.2对于柱层析有什么指导意义吗。我们能估计我的斑点在柱层析时什么时间出来吗?
3.一般把两种溶剂混合时,采用高极性/低极性的体积比为1/3的混合溶剂,如果有分开的迹象,再调整比例,达到最佳效果，如果没有分开的迹象，最好是换溶剂。举个例子来说，也就是说当他门的配比为1/3时分不开就要换了，这经验是可靠的吗？此外我还想问几个问提，一般来说将斑点调到0.3时可以估计他能被柱子冲下来，那如果有 两个斑点怎么办，第一个斑点出来了，第二个什么时候出来呢，可以根据TLC上的δRF值来估计吗？给予回答。
cw0926战友说的不错，我再补充一点。
从我个人经验来讲，TLC板上的Rf值只是对你的淋洗剂的选择起一个指导性的作用，并不是绝对的。很多时候板上的分离情况很好但是上了柱总是不能很好的分离，总是一起下来。有时者反之，板上分离不好，但是上柱结果却很好。
我一般喜欢先用低极性的溶剂先把色素冲一下。淋洗的时候，采用多次梯度改变，每次极性改变小点，这个样子对难分离的物质纯化效果比较好！！
还有就是在装柱的时候 把硅胶柱上长些 这样柱效也会高些
分离效果会好些 我一直都是这样的
1.“一般淋洗剂是采用TLC分析得到的展开剂的比例再稀释一倍后的溶剂（此时目标产物值大致在0.3左右）。”我们做的时候是这样的，我的产品在展开剂正己烷：乙酸乙酯＝3：1TLC比较好，上柱的时候洗脱剂选择正己烷：乙酸乙酯＝6：1或者5：1。另外如果洗脱剂极性太大，很容易将产品点与杂质点一块冲下来，但是如果极性很小，过柱子很慢不说，有些时候样品谱带扩散很严重，分离也不好。
2.并且正如楼上几位所说，TLC仅仅是参考，具体洗脱剂还要摸索。至于什么时候出点，最保险的方法就是TLC跟踪检测，再就是过柱子的时候可以用试管半管接，尽量避免混合点。
3.如果过柱子分离不好除了可以调整洗脱剂以外，还可以将柱子装长，也可以起到很好的分离效果。过柱子这个东西，多做几次，就会熟悉了。
以上只是个人的一点经验，如有不对的地方请大家指教
cw0926战友说的不错，我再补充一点。
从我个人经验来讲，TLC板上的Rf值只是对你的淋洗剂的选择起一个指导性的作用，并不是绝对的。很多时候板上的分离情况很好但是上了柱总是不能很好的分离，总是一起下来。有时者反之，板上分离不好，但是上柱结果却很好。
我一般喜欢先用低极性的溶剂先把色素冲一下。淋洗的时候，采用多次梯度改变，每次极性改变小点，这个样子对难分离的物质纯化效果比较好！！
1.“一般淋洗剂是采用TLC分析得到的展开剂的比例再稀释一倍后的溶剂（此时目标产物值大致在0.3左右）。”我们做的时候是这样的，我的产品在展开剂正己烷：乙酸乙酯＝3：1TLC比较好，上柱的时候洗脱剂选择正己烷：乙酸乙酯＝6：1或者5：1。另外如果洗脱剂极性太大，很容易将产品点与杂质点一块冲下来，但是如果极性很小，过柱子很慢不说，有些时候样品谱带扩散很严重，分离也不好。
2.并且正如楼上几位所说，TLC仅仅是参考，具体洗脱剂还要摸索。至于什么时候出点，最保险的方法就是TLC跟踪检测，再就是过柱子的时候可以用试管半管接，尽量避免混合点。
3.如果过柱子分离不好除了可以调整洗脱剂以外，还可以将柱子装长，也可以起到很好的分离效果。过柱子这个东西，多做几次，就会熟悉了。
以上只是个人的一点经验，如有不对的地方请大家指教
理论上硅胶量大一些，柱子长一些，有利于分离，但是硅胶会对产品有一定的吸附，损失也大一些，要综合考虑一下。
我一般喜欢先用低极性的溶剂先把色素冲一下。淋洗的时候，采用多次梯度改变，每次极性改变小点，这个样子对难分离的物质纯化效果比较好！！
请问梯度洗脱时，如何调极性啊？
各位高手，能不能指点一下啊
将下面的一封电子邮件跟大家共享，希望对植化分离初学者的有所启发：
问：我最近装了两根硅胶柱感觉效果都很不好，作为生物碱的样慢慢在消耗掉感觉很郁闷，可能对硅胶理解上还存在问题。首先在极性选择上的问题，我用RF值大约为0.1的洗脱剂装柱作为第一梯度也没有得到第一个点，出来的基本上是含原点的混点，你告诉我用第一梯度装柱可能是针对纯化后的样品吧，可能我的样纯化不够是不是得用更小极性的装柱先洗脱。另外这边不管装干柱还是湿柱都采用硅胶拌样上法，之前在那边的湿法上样是不是有问题。另外选柱他们有的人建议是短粗的柱子，说那样能洗脱快一些，减少硅胶对样的吸附和样品在柱子中扩散。
可能过几天我要装一根比较大的柱子，希望能在之前能对硅胶柱了解，希望收到邮
>件后尽快给我回复，谢！
电邮回复 ：
你现在开始做的应该是粗分,不要抱太大的希望第一根柱子就能拿到纯品,除非在薄层板上真正有很好的单点,但是那样可能花费很多时间,你的Rf值在0.1未必就是一个单点,因为展开极性太低,很可能要分离的混合物没有有效展开,还得用适当加大极性,看是否是一个点.我不赞成粗分的时候这样做,除非TLC有很明确的且分离度很好的点,粗分能达到分组或分段的目的就可以了.
所以,粗分RF要求不那么高,可以选择一个洗脱系统能将其分成几部分就行,也就是说TLC上的点可以是在板上均匀分布的,这样你能节省不少时间溶剂,合并回收也很方便,实在不行就是采用一般方法,从低到高极性的试剂进行冲洗,比如常规可以用Chlorof.:Methanol=99:1,95:5:90:10,85:15:.....70:30;甲醇部分超过35可以适当把增加幅度加大(10或15个单位增加),这样分成10个左右组分也行,之后再进行单体分离.
柱子的选择,粗分的时候粗短的较好,满足5:1以上就行,如果走减压柱都不需要这个比例,生物碱不要过多的在柱子上停留。
我是刚刚进入实验室的植化研究生,经过一段时间才发现,做植化的难度除了最后的解谱,唯一使我困惑可能要数如何优化洗脱条件是最大的.由于刚开始都是师兄师姐传授经验,但一旦自己亲自动手就发现有很多问题!一些经验不清楚其中的原理!
所以想借园子里这一方宝地,和各位园友讨论一下如何用薄层板来摸柱色谱的洗脱条件?例如可以分两个方面,正相柱和反相柱都分别怎样控制薄层板的RF值,才能使分离效果达到最好?
希望各位大师园友能提供你们宝贵的经验,感激不尽!
我们过柱子的经验是:
1.正相硅胶柱:一般柱色谱的洗脱剂要使你要得点在 TLC上Rf 值为0.2-0.3,最好你要得点与杂点的Rf值能相差0.1,这样的展开剂可用来作为柱色谱洗脱剂,这样分离效果应该比较好.
2.反相柱:我过的反相柱是反相MCI，所用的洗脱剂条件是按照HPLC的流动相条件来摸索的。由于自己 装得反相MCI柱，没有HPLc的柱子装的紧密，且颗粒相对较大（我用的是50um），所以柱效肯定没有HPLC的好，所以为了达到好的分离效果我的反相柱洗脱剂将HPLC的流动相的有机溶剂减小了10％，分离效果比较好。
至于反相 C18柱我没有过过，网上的网友说可以通过点反相板来确定洗脱剂，应该和正相柱的选择差不多，你可以在园子里搜索一下，又很多资料。
具体操作要根据你的物质条件有关，可以通过几次调整来找到最好的洗脱剂，祝你好运！
我们过柱子的经验是:
1.正相硅胶柱:一般柱色谱的洗脱剂要使你要得点在 TLC上Rf 值为0.2-0.3,最好你要得点与杂点的Rf值能相差0.1,这样的展开剂可用来作为柱色谱洗脱剂,这样分离效果应该比较好.
2.反相柱:我过的反相柱是反相MCI，所用的洗脱剂条件是按照HPLC的流动相条件来摸索的。由于自己 装得反相MCI柱，没有HPLc的柱子装的紧密，且颗粒相对较大（我用的是50um），所以柱效肯定没有HPLC的好，所以为了达到好的分离效果我的反相柱洗脱剂将HPLC的流动相的有机溶剂减小了10％，分离效果比较好。
至于反相 C18柱我没有过过，网上的网友说可以通过点反相板来确定洗脱剂，应该和正相柱的选择差不多，你可以在园子里搜索一下，又很多资料。
具体操作要根据你的物质条件有关，可以通过几次调整来找到最好的洗脱剂，祝你好运！
我师兄的经验就是 :柱层析关键在于柱子是否装好和淋洗剂是否选择恰当。而淋洗剂的选择则是通过TLC确定。这里要指出的一点是：TLC的作用除了跟踪反应进程，检测试剂和原料纯度外，一个重要的用途就是为柱层析选择适当的淋洗剂。
上样完毕后，接着即用淋洗剂淋洗。淋洗剂一般采用TLC分析得到的展开剂的比例再稀释一倍后的溶剂。由于层析柱和薄板的不同，即使两者使用的硅胶都相同，但是在把TLC分析得到的展开剂用在柱层析时，也显得极性偏大，所以要稀释一倍，但又不能稀 释太多，否则成了靠扩散作用来分离，效果也不会好。
希望大家踊跃讨论,使大家在以后的实验中能少走弯路!
就这个经验其实我想请问几个问题：
1.一般淋洗剂是采用TLC分析得到的展开剂的比例再稀释一倍后的溶剂（此时目标产物值大致在0.3左右）。这句话怎么理解，能不能举个例子来说一下。
2.展开剂的极性太小，点分不开，极性太大，也分不开.一般以目标产物的Rf值在0.22左右为最佳。调到0.2对于柱层析有什么指导意义吗。我们能估计我的斑点在柱层析时什么时间出来吗?
3.一般把两种溶剂混合时,采用高极性/低极性的体积比为1/3的混合溶剂,如果有分开的迹象,再调整比例,达到最佳效果，如果没有分开的迹象，最好是换溶剂。举个例子来说，也就是说当他门的配比为1/3时分不开就要换了，这经验是可靠的吗？此外我还想问几个问提，一般来说将斑点调到0.3时可以估计他能被柱子冲下来，那如果有 两个斑点怎么办，第一个斑点出来了，第二个什么时候出来呢，可以根据TLC上的δRF值来估计吗？给予回答。
cw0926战友说的不错，我再补充一点。
从我个人经验来讲，TLC板上的Rf值只是对你的淋洗剂的选择起一个指导性的作用，并不是绝对的。很多时候板上的分离情况很好但是上了柱总是不能很好的分离，总是一起下来。有时者反之，板上分离不好，但是上柱结果却很好。
我一般喜欢先用低极性的溶剂先把色素冲一下。淋洗的时候，采用多次梯度改变，每次极性改变小点，这个样子对难分离的物质纯化效果比较好！！
还有就是在装柱的时候 把硅胶柱上长些 这样柱效也会高些
分离效果会好些 我一直都是这样的
1.“一般淋洗剂是采用TLC分析得到的展开剂的比例再稀释一倍后的溶剂（此时目标产物值大致在0.3左右）。”我们做的时候是这样的，我的产品在展开剂正己烷：乙酸乙酯＝3：1TLC比较好，上柱的时候洗脱剂选择正己烷：乙酸乙酯＝6：1或者5：1。另外如果洗脱剂极性太大，很容易将产品点与杂质点一块冲下来，但是如果极性很小，过柱子很慢不说，有些时候样品谱带扩散很严重，分离也不好。
2.并且正如楼上几位所说，TLC仅仅是参考，具体洗脱剂还要摸索。至于什么时候出点，最保险的方法就是TLC跟踪检测，再就是过柱子的时候可以用试管半管接，尽量避免混合点。
3.如果过柱子分离不好除了可以调整洗脱剂以外，还可以将柱子装长，也可以起到很好的分离效果。过柱子这个东西，多做几次，就会熟悉了。
以上只是个人的一点经验，如有不对的地方请大家指教
cw0926战友说的不错，我再补充一点。
从我个人经验来讲，TLC板上的Rf值只是对你的淋洗剂的选择起一个指导性的作用，并不是绝对的。很多时候板上的分离情况很好但是上了柱总是不能很好的分离，总是一起下来。有时者反之，板上分离不好，但是上柱结果却很好。
我一般喜欢先用低极性的溶剂先把色素冲一下。淋洗的时候，采用多次梯度改变，每次极性改变小点，这个样子对难分离的物质纯化效果比较好！！
1.“一般淋洗剂是采用TLC分析得到的展开剂的比例再稀释一倍后的溶剂（此时目标产物值大致在0.3左右）。”我们做的时候是这样的，我的产品在展开剂正己烷：乙酸乙酯＝3：1TLC比较好，上柱的时候洗脱剂选择正己烷：乙酸乙酯＝6：1或者5：1。另外如果洗脱剂极性太大，很容易将产品点与杂质点一块冲下来，但是如果极性很小，过柱子很慢不说，有些时候样品谱带扩散很严重，分离也不好。
2.并且正如楼上几位所说，TLC仅仅是参考，具体洗脱剂还要摸索。至于什么时候出点，最保险的方法就是TLC跟踪检测，再就是过柱子的时候可以用试管半管接，尽量避免混合点。
3.如果过柱子分离不好除了可以调整洗脱剂以外，还可以将柱子装长，也可以起到很好的分离效果。过柱子这个东西，多做几次，就会熟悉了。
以上只是个人的一点经验，如有不对的地方请大家指教
理论上硅胶量大一些，柱子长一些，有利于分离，但是硅胶会对产品有一定的吸附，损失也大一些，要综合考虑一下。
我一般喜欢先用低极性的溶剂先把色素冲一下。淋洗的时候，采用多次梯度改变，每次极性改变小点，这个样子对难分离的物质纯化效果比较好！！
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可能过几天我要装一根比较大的柱子，希望能在之前能对硅胶柱了解，希望收到邮
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你现在开始做的应该是粗分,不要抱太大的希望第一根柱子就能拿到纯品,除非在薄层板上真正有很好的单点,但是那样可能花费很多时间,你的Rf值在0.1未必就是一个单点,因为展开极性太低,很可能要分离的混合物没有有效展开,还得用适当加大极性,看是否是一个点.我不赞成粗分的时候这样做,除非TLC有很明确的且分离度很好的点,粗分能达到分组或分段的目的就可以了.
所以,粗分RF要求不那么高,可以选择一个洗脱系统能将其分成几部分就行,也就是说TLC上的点可以是在板上均匀分布的,这样你能节省不少时间溶剂,合并回收也很方便,实在不行就是采用一般方法,从低到高极性的试剂进行冲洗,比如常规可以用Chlorof.:Methanol=99:1,95:5:90:10,85:15:.....70:30;甲醇部分超过35可以适当把增加幅度加大(10或15个单位增加),这样分成10个左右组分也行,之后再进行单体分离.
柱子的选择,粗分的时候粗短的较好,满足5:1以上就行,如果走减压柱都不需要这个比例,生物碱不要过多的在柱子上停留。