在用硅胶柱梯度洗脱之后,大家都是怎样合并流分的?有什么样的经验可以交流么?
我是新手,第一次做这个。
我看有的比较粗,就按每个梯度合并,再细分;
有的比较细,以TLC的结果跟踪,最后按照TLC的结果合并流分再细分。
按道理说,这两者是殊途同归的,大家一般比较倾向于哪种方式呢?
比较粗?啥意思,没看明白!
都以TLC分的吧,也有按色带分的,但比较不准。
一个梯度会洗好的成分下来,这样子做后面再分还有很多要分的
“按每个梯度合并,再细分”, 这种方式我们是很少采用的,除非你是很粗的粗分,但既然你是上过一遍硅胶的流份,不管怎样,样品还是有一定的分离度,所以还是TLC点板跟踪的好, 怎么合并主要取决于你的目标点,尽量做到目标点不分散,这样损失才小,还有取决于你目标点的纯度问题,在分离的过程中会发现有的流份含有的目标点的纯度不一样,就是有的含有杂质多,有的杂质少,这时你就要看纯度高的样品量有多少,量少的话就要和不纯的一起合并或者把不纯的样品纯度再提高一点和较纯的一起合并。
主要考虑中心点和量的问题!
以TLC检测为主
点样一定要与前面的馏分相呼应,这样的合并更具有针对性!
我觉得 一根大柱子,没有必要分得很细,听说经常一根柱子就砍成几段就行.
一个梯度的合并就行,我就是这样做的,之后再上小柱细分,剩时又省力,效果也不错
还是按TLC上的点来分比较好,因为很多时候就算在TLC上只有一个点,走液相的话还是有很多峰。
我都是按薄层走的点来分的,因为我是一次性分完,不再上小柱,自然要谨慎些。
我都是按薄层走的点来分的,因为我是一次性分完,不再上小柱,自然要谨慎些。
我倾向于先粗分后细分,因为用一根柱子很难拿到一定数量的化合物,而且纯度也不够高,通常都需要进一步的纯化。
一般总浸膏上大的减压柱下来的成分都是TLC分析,然后大致合并一下,目的就是砍段,不用太精确。
下来的成分再细分,一般上加压柱吧,上一两根加压柱,最后上根凝胶柱,根据对目标点溶解性、性状、颜色的了解,接的时候接的细一些,尽量把一种成分接到一瓶里或几瓶里吧。
手分的话,最后就多上几根凝胶柱,如果最后用液相的话就无所谓了,只要基线比较干净,峰又分的比较开,就可以用液相制备了。
另外,TLC除去参考硫酸-香草醛显色结果外,还可以参考荧光啊。
大家的回答!
现在做了一段之后有了自己的想法,确实是硅胶柱粗分的时候,以tlc结果跟踪就行,因为同一梯度下来的东西还是有一定的分离度的。粗分之后再进行反相柱或是凝胶柱的细分。
在这个过程中我发现其实没有必要将硅胶柱粗分的那么细(我第一遍做的时候总是直到薄层上的点几乎没有了才换梯度),这样既浪费溶剂也浪费时间,完全可以在点板结果斑点量明显有所减少的时候就换。
可能这就是所谓的跑柱子的“手法”问题吧!
另外我还想问,硅胶柱粗分的时候大家一般是用点板跟踪的方法,为什么都不用HPLC方法呢,这样看的会更清楚一些。
我想了想,是不是因为液相上的洗脱剂极性不是那么好把握的,没有点板方便?
一点拙见!
我是新手,第一次做这个。
我看有的比较粗,就按每个梯度合并,再细分;
有的比较细,以TLC的结果跟踪,最后按照TLC的结果合并流分再细分。
按道理说,这两者是殊途同归的,大家一般比较倾向于哪种方式呢?
比较粗?啥意思,没看明白!
都以TLC分的吧,也有按色带分的,但比较不准。
一个梯度会洗好的成分下来,这样子做后面再分还有很多要分的
“按每个梯度合并,再细分”, 这种方式我们是很少采用的,除非你是很粗的粗分,但既然你是上过一遍硅胶的流份,不管怎样,样品还是有一定的分离度,所以还是TLC点板跟踪的好, 怎么合并主要取决于你的目标点,尽量做到目标点不分散,这样损失才小,还有取决于你目标点的纯度问题,在分离的过程中会发现有的流份含有的目标点的纯度不一样,就是有的含有杂质多,有的杂质少,这时你就要看纯度高的样品量有多少,量少的话就要和不纯的一起合并或者把不纯的样品纯度再提高一点和较纯的一起合并。
主要考虑中心点和量的问题!
以TLC检测为主
点样一定要与前面的馏分相呼应,这样的合并更具有针对性!
我觉得 一根大柱子,没有必要分得很细,听说经常一根柱子就砍成几段就行.
一个梯度的合并就行,我就是这样做的,之后再上小柱细分,剩时又省力,效果也不错
还是按TLC上的点来分比较好,因为很多时候就算在TLC上只有一个点,走液相的话还是有很多峰。
我都是按薄层走的点来分的,因为我是一次性分完,不再上小柱,自然要谨慎些。
我都是按薄层走的点来分的,因为我是一次性分完,不再上小柱,自然要谨慎些。
我倾向于先粗分后细分,因为用一根柱子很难拿到一定数量的化合物,而且纯度也不够高,通常都需要进一步的纯化。
一般总浸膏上大的减压柱下来的成分都是TLC分析,然后大致合并一下,目的就是砍段,不用太精确。
下来的成分再细分,一般上加压柱吧,上一两根加压柱,最后上根凝胶柱,根据对目标点溶解性、性状、颜色的了解,接的时候接的细一些,尽量把一种成分接到一瓶里或几瓶里吧。
手分的话,最后就多上几根凝胶柱,如果最后用液相的话就无所谓了,只要基线比较干净,峰又分的比较开,就可以用液相制备了。
另外,TLC除去参考硫酸-香草醛显色结果外,还可以参考荧光啊。
大家的回答!
现在做了一段之后有了自己的想法,确实是硅胶柱粗分的时候,以tlc结果跟踪就行,因为同一梯度下来的东西还是有一定的分离度的。粗分之后再进行反相柱或是凝胶柱的细分。
在这个过程中我发现其实没有必要将硅胶柱粗分的那么细(我第一遍做的时候总是直到薄层上的点几乎没有了才换梯度),这样既浪费溶剂也浪费时间,完全可以在点板结果斑点量明显有所减少的时候就换。
可能这就是所谓的跑柱子的“手法”问题吧!
另外我还想问,硅胶柱粗分的时候大家一般是用点板跟踪的方法,为什么都不用HPLC方法呢,这样看的会更清楚一些。
我想了想,是不是因为液相上的洗脱剂极性不是那么好把握的,没有点板方便?
一点拙见!