我有一个样品。里面有一个主点，需要上反相柱纯化，

本实验室没有反相板，该样品用二氯甲烷：甲醇（10：1）跑板时Rf值为0.5.请问哪位大侠能给点经验，用多少比例的甲醇上反相柱

反相柱的洗脱条件可以通过两个方面来确定:
1)根据HPLC条件来确定。我过的反相柱是反相MCI的经验是，由于自己装的反相柱没有HPLC的反相柱填料致密且填料颗粒也相对HPLC较大（50um），故柱效肯定没有HPLC好，因此为了达到好的分离效果我的反相柱洗脱剂将HPLC的流动相的有机溶剂减小了10％，分离效果比较好。并且你可以选择用梯度洗脱也可以选择等梯度洗脱,当然也要根据你的实际情况来确定洗脱剂条件。反相柱不像硅胶正相柱，反相柱可以反复使用多次，因此我建议你可以通过HPLC条件来摸索洗脱剂条件，这样比较快，且效率比较高。
2）根据反相板来确定。这一块园子里又很多资料，你自己查吧。
不过我觉得既然你的样品用二氯甲烷：甲醇（10：1）跑板时Rf值为0.5，为什么不用正相硅胶柱纯化啊，毕竟正相硅胶比反相柱便宜一些。
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您的指导。主要是这馏分上硅胶柱分离效果不好，后面的杂质会一起被洗脱下来