听说凝胶柱也是可以摸条件的,请问各位高手具体如何操作?多谢!
正相的就是利用分子筛原理,根据分子量大小分离,所以只要等度洗脱。
选洗脱液的原则有三:
1.密度不能太大,不能使凝胶漂浮起来。比如氯仿-甲醇系统,比例在0-100到7-3之间均可,氯仿-甲醇比例大于7-3凝胶(我指Sephadex LH20)就会漂浮起来。
2.参考干胶溶胀表。溶胀系数有规定小于多少的溶剂就不能用。另外,所选的溶剂的溶胀系数不能大于原有溶剂的,否则会把柱子胀裂。
3.洗脱液的对所上样品的溶解性好,使样品在最少的溶剂中溶解。
反相的除了分子筛原理还有反相分配原理。一般用极性大的先洗脱,然后极性逐渐增大。和硅胶的摸条件类似吧。就是反过来的。
等度洗脱的话感觉不同的溶剂系统的分离效果不甚相同,如果想选择分离效果最好的溶剂系统,这个条件如何确定呢?
正相的就是利用分子筛原理,根据分子量大小分离,所以只要等度洗脱。
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1.密度不能太大,不能使凝胶漂浮起来。比如氯仿-甲醇系统,比例在0-100到7-3之间均可,氯仿-甲醇比例大于7-3凝胶(我指Sephadex LH20)就会漂浮起来。
2.参考干胶溶胀表。溶胀系数有规定小于多少的溶剂就不能用。另外,所选的溶剂的溶胀系数不能大于原有溶剂的,否则会把柱子胀裂。
3.洗脱液的对所上样品的溶解性好,使样品在最少的溶剂中溶解。
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需要摸索吧。
LH-20对含羟基较多的物质非常敏感,比如马来酸,富马酸,酒石酸都差了一个羟基,用甲醇洗脱不开,用丙酮是123的出峰顺序,用水是321的出峰顺序。
建议你看看这本书:
《Preparative Gel Chromatography on Sephadex LH-20》
请问哪里能搞到这本书嘞?电子版也行啊~
需要摸索吧。
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找慧德易要吧,他们是进口LH-20的总代理,也有这本书的光盘,免费发的。
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