关于sephadex LH-20柱有几个问题请教大家:
1.我们实验室的凝胶都是溶于甲醇中保存.取出装凝胶柱时怎么算柱体积呢?
1的流速你是不是控制的太快了,越慢越好的,三四秒钟一滴效果比较好,如果甲醇:二氯甲烷(1:1)都溶解得不好,直接用甲醇溶解,然后用甲醇跑柱子拭拭.
2sephadex LH-20可以走梯度的,但是不要跨度太大.
以我的经验， sephadex LH-20最好用等度，如果在甲醇溶解的话，直接用甲醇单一溶剂，分离度要利用速度来控制。上样以后，把柱子关掉，先不走流动相，放置1-2个小时左右。之后开始慢慢滴（3秒/滴），充分让它们分布，之后速度控制到1秒/滴。如果因为样品溶解度问题，必须要用梯度的话，如楼上所说，不宜跨度太大，因为在不同溶剂中的膨胀系数不同，对分离度影响很大。
楼上的战友!
我粗略算了下大概流速有1.7-1.8ml/min吧,比起"三四秒一滴"好象流速是够大的.有没有多长时间跑完一个柱体积的说法? 排开流速大的影响,那我这种情况能不能大致判断出用甲醇-二氯甲烷不合适呢?
另外,我的样品在甲醇里溶得不好.
如果在甲醇里容得不好，就用甲醇-二氯甲烷一定比例等度洗脱就可以了。
甲醇-二氯甲烷这个系统最好不要走梯度，因为 sephadex LH-20在甲醇和二氯甲烷中的溶胀体积不一样
关于sephadex LH-20柱有几个问题请教大家:
1.我们实验室的凝胶都是溶于甲醇中保存.取出装凝胶柱时怎么算柱体积呢?
我又试了一次,用同样的柱子,走同样的等度,将流速调到几秒一滴,洗脱时间是延缓了,但色带还是一起下来了.而且洗脱体积基本上没太大变化.另外肯定没超载,色带完后没拖拖拉拉的东西出来,柱子走完后挺干净.
流速影响似乎并不大 啊!
不知有人用过丙酮系统跑柱子没,分的是什么性质的化合物,效果如何?欢迎分享一下经验啊!
为什么不用甲醇：氯仿＝1:1呢？个人觉得效果还不错。
用丙酮会缩的很厉害，柱床体积可能连一半都不到了吧。
你用这样的洗脱体系分不开，可能是这个条件不合适。改变一下溶剂配比吧，LH－20调节溶剂对分离影响很大的。
你可以去这里要本《Preparative Gel Chromatography on Sephadex LH-20》
是啊，试试甲醇：氯仿＝1:1，或者正己烷-二氯甲烷-甲醇=2：1：1看看。
1.我们实验室的凝胶都是溶于甲醇中保存.取出装凝胶柱时怎么算柱体积呢?
1的流速你是不是控制的太快了,越慢越好的,三四秒钟一滴效果比较好,如果甲醇:二氯甲烷(1:1)都溶解得不好,直接用甲醇溶解,然后用甲醇跑柱子拭拭.
2sephadex LH-20可以走梯度的,但是不要跨度太大.
以我的经验， sephadex LH-20最好用等度，如果在甲醇溶解的话，直接用甲醇单一溶剂，分离度要利用速度来控制。上样以后，把柱子关掉，先不走流动相，放置1-2个小时左右。之后开始慢慢滴（3秒/滴），充分让它们分布，之后速度控制到1秒/滴。如果因为样品溶解度问题，必须要用梯度的话，如楼上所说，不宜跨度太大，因为在不同溶剂中的膨胀系数不同，对分离度影响很大。
楼上的战友!
我粗略算了下大概流速有1.7-1.8ml/min吧,比起"三四秒一滴"好象流速是够大的.有没有多长时间跑完一个柱体积的说法? 排开流速大的影响,那我这种情况能不能大致判断出用甲醇-二氯甲烷不合适呢?
另外,我的样品在甲醇里溶得不好.
如果在甲醇里容得不好，就用甲醇-二氯甲烷一定比例等度洗脱就可以了。
甲醇-二氯甲烷这个系统最好不要走梯度，因为 sephadex LH-20在甲醇和二氯甲烷中的溶胀体积不一样
关于sephadex LH-20柱有几个问题请教大家:
1.我们实验室的凝胶都是溶于甲醇中保存.取出装凝胶柱时怎么算柱体积呢?
我又试了一次,用同样的柱子,走同样的等度,将流速调到几秒一滴,洗脱时间是延缓了,但色带还是一起下来了.而且洗脱体积基本上没太大变化.另外肯定没超载,色带完后没拖拖拉拉的东西出来,柱子走完后挺干净.
流速影响似乎并不大 啊!
不知有人用过丙酮系统跑柱子没,分的是什么性质的化合物,效果如何?欢迎分享一下经验啊!
为什么不用甲醇：氯仿＝1:1呢？个人觉得效果还不错。
用丙酮会缩的很厉害，柱床体积可能连一半都不到了吧。
你用这样的洗脱体系分不开，可能是这个条件不合适。改变一下溶剂配比吧，LH－20调节溶剂对分离影响很大的。
你可以去这里要本《Preparative Gel Chromatography on Sephadex LH-20》
是啊，试试甲醇：氯仿＝1:1，或者正己烷-二氯甲烷-甲醇=2：1：1看看。