各位好：
本人最近刚刚接触肝微粒体制备技术，在制备过程中有些小问题困扰着我，希望有仙人指路！
Q1：在门静脉灌流注射过程中，如何达到在冰上操作的要求？是先将大鼠的肝取下进行吧？
Q2：因为肝微粒体经过超高速离心，已经成块状，如何在不影响活性的前提下将其很好的悬浮？如果分散的不均匀，检测出的蛋白含量是很不准确的吧！
Q3: 看了几篇关于检测肝微粒体酶活的方法的文献，就是想知道如何实现充入CO？有专用的仪器吗？
问题可能会很白痴，但是的确是初学者发自肺腑的心声，要笑就请偷偷的笑吧，但是笑过之后，请您留下您的答案~~~~~~
PS：最好哪位热心人，给我留下您宝贵的联系方式，以便更方便的赐教，小女子在此谢过！
Q1：你的灌注液预先冷冻就可以了
Q2：用滴管反复吹打，也有人置于涡旋仪上混匀，本人倾向前者
Q3：不要测这个，没意义，教科书上的内容，真正要测酶活，就测定探针底物的反应活性，足矣
e-mail：hyqjeff@126.com
Q1：生理盐水要提前置冰箱遇冷，大鼠要平放在冰盘中，在肝脏取出前灌注，取出后就不好灌了
Q2：对的，肯定不准确，你这种情况可以用国产枪吹打，进口的枪吹打力量不行，如果结块还打不碎，再匀浆一遍OK了
Q3：充CO与其他实验充O2是一样的，要说专用仪器，那就是CO瓶了
灌注液预冷，其实我们在做到过程中不灌流也没太大的影响
吹打很难分散开，可以匀浆或者研磨，一定要混悬均匀
有卖CO罐的，也可以用浓硫酸和甲酸加热制备。
你好，我也是做肝微粒体的，我做的是肝微粒体体外孵育，请问：
1、体系中含有的NADPH,微粒体蛋白等浓度是指在体系中的终浓度，还是之前配好的浓度，加入多少量而已
2、体系中的所含药物的浓度有什么依据的吗，体系的体积以多少为好
3、若孵育60min，NADPH用0.5mmol/L的浓度够吗
问题比较多，希望高手们可以指点，在此先谢！
10万g离心后，确实很难将其由离心管重新悬浮，我用电动的那种匀浆器匀一下就可以了，不过应该对酶活性影响不大吧
1、我们都用匀浆
2、买CO瓶子，再皮管的一端加个枪头就可以了。
CO瓶子哪里有卖？
本人最近刚刚接触肝微粒体制备技术，在制备过程中有些小问题困扰着我，希望有仙人指路！
Q1：在门静脉灌流注射过程中，如何达到在冰上操作的要求？是先将大鼠的肝取下进行吧？
Q2：因为肝微粒体经过超高速离心，已经成块状，如何在不影响活性的前提下将其很好的悬浮？如果分散的不均匀，检测出的蛋白含量是很不准确的吧！
Q3: 看了几篇关于检测肝微粒体酶活的方法的文献，就是想知道如何实现充入CO？有专用的仪器吗？
问题可能会很白痴，但是的确是初学者发自肺腑的心声，要笑就请偷偷的笑吧，但是笑过之后，请您留下您的答案~~~~~~
PS：最好哪位热心人，给我留下您宝贵的联系方式，以便更方便的赐教，小女子在此谢过！
Q1：你的灌注液预先冷冻就可以了
Q2：用滴管反复吹打，也有人置于涡旋仪上混匀，本人倾向前者
Q3：不要测这个，没意义，教科书上的内容，真正要测酶活，就测定探针底物的反应活性，足矣
e-mail：hyqjeff@126.com
Q1：生理盐水要提前置冰箱遇冷，大鼠要平放在冰盘中，在肝脏取出前灌注，取出后就不好灌了
Q2：对的，肯定不准确，你这种情况可以用国产枪吹打，进口的枪吹打力量不行，如果结块还打不碎，再匀浆一遍OK了
Q3：充CO与其他实验充O2是一样的，要说专用仪器，那就是CO瓶了
灌注液预冷，其实我们在做到过程中不灌流也没太大的影响
吹打很难分散开，可以匀浆或者研磨，一定要混悬均匀
有卖CO罐的，也可以用浓硫酸和甲酸加热制备。
你好，我也是做肝微粒体的，我做的是肝微粒体体外孵育，请问：
1、体系中含有的NADPH,微粒体蛋白等浓度是指在体系中的终浓度，还是之前配好的浓度，加入多少量而已
2、体系中的所含药物的浓度有什么依据的吗，体系的体积以多少为好
3、若孵育60min，NADPH用0.5mmol/L的浓度够吗
问题比较多，希望高手们可以指点，在此先谢！
10万g离心后，确实很难将其由离心管重新悬浮，我用电动的那种匀浆器匀一下就可以了，不过应该对酶活性影响不大吧
1、我们都用匀浆
2、买CO瓶子，再皮管的一端加个枪头就可以了。
CO瓶子哪里有卖？