本人大三的时候做过生化实验,知道的蛋白质含量的测定的方法也就几个,凯氏最经典的,正如codex(不知道这个标准在业界里面的地位如何) stan 207-1999测定蛋白质的方法就是引用iso 8968-1 2001的凯氏定氮法.
biuret法(容易被糖,钾离子干扰),lowry法(容易被氨干扰),好像也不怎么行.不知道传说中的考马斯亮蓝g250法怎么样呢?
参考文献:A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding .Bradford ANALYTICAL BIOCHEMISTRY 72, 248-254 (1976)
如有错误,不吝指正.聊以抛砖引玉.
bradford法测蛋白浓度，受去污剂（如trixon-100）影响。
考马斯亮蓝g250法采用的是分光光度法，误差还是有些大的
可以用凯氏定氮法,凯氏定氮法由Kieldahl于1833年首创，使其成为一种元素分析方法。各种蛋白质的组成元素中，氮的相对丰度基本稳定，含量平均为16％，而食品增稠剂瓜尔豆胶、田菁胶和胡麻胶中除蛋白质外的主要成分都不含有氮，因此试样中有机氮含量的多少代表了蛋白质含量的多少，即有机氮含量乘以蛋白质系数即为蛋白质总量。按试样用量的多少，凯氏定氮法可分为常量法和微量法。常量凯氏定氮法取样量大，分解消化后的消化液全部用于氨转化；微量凯氏定氮法取样量少，全部用于氨转化。我们主要采用微量凯氏定氮法测定蛋白质含量。 改进经典的蛋白质含量测定方法，改进凯氏定氮法的消化装置和试剂，消化后直接用甲醛法测定。结果：改进法与经典方法比较，测定结果基本一致，经t检验无显著性差异（t＝0.07556,P＞0.05)。该法分析速度快，消除了空气污染，操作简便，可用于食品中蛋白质的测定。
现在奶粉测定蛋白含量好像就用的是凯氏定氮法，三鹿添加三聚氰胺就是提高含氮量，从而造成蛋白含量高的假象，因此，凯氏定氮法方法有缺陷，强烈建议提出更科学的蛋白含量测定方法。欢迎大家献智献计！
现在的标准是采用凯氏定氮法。当然可以加三聚氰胺来提高氮含量。这些奶民的化学知识不错
凯氏定氮法+三聚氰胺的含量测定法
考马斯亮蓝g250法采用的是分光光度法，误差还是有些大的
凯氏定氮法+三聚氰胺的含量测定法
凯氏定氮 双缩脲 lowry法
三法联用
慢慢的把牛奶的紫外指纹图谱做出来
今后 LC肯定是必然选择
国外不做奶粉蛋白含量测定吗，关键对付造假要严惩
急时帖啊!是啊,国外奶粉行业标准应该有好些的办法吧?
假奶粉事件不是检测技术上的问题，是管理上的问题。再完美的技术也防不了，检测只是抽样，如果内外勾结，抽样本身就可以做手脚，那么技术再好也不能反映总体是否真正合格。国外要是出了这么大的事，ZF好下台了，一般来说，事情还在萌芽中就被管理部门发现，扼杀了。所以我看打假的话，只有国外向我们国家学习，而不是反之。
质量不是检验出来的！
检验只是质量管理中一个很小的部分。
不知道ELISA检测蛋白质能否适用？
检查是手段之一，但是疏导终于堵漏，应该加强管理，从源头奶管理入手，实行产供销一体经营制，而非合作化！
凯氏定氮 双缩脲 lowry法
三法联用
慢慢的把牛奶的紫外指纹图谱做出来
今后 LC肯定是必然选择
应该用新的方法来测定蛋白含量啦，但是每种方法都有他们的优缺点，要是想掺假用哪种方法都不行的
我认为考马斯亮蓝比较好啊
一个办法是：
1 取5 毫升待测鲜奶和已知鲜奶（做对照），放入 5000 MW cutoff 的透析膜中，对4000毫升PBS，（在磁力搅拌器上）搅拌、室温获4度下透析4小时。
2 用凯氏定氮法测定透析后的待测鲜奶和已知鲜奶，对比后可得出结论。
我不信这样小个化工产品可以冒充大个蛋白！
不难！
质量不是检验出来的！
检验只是质量管理中一个很小的部分。
不知道ELISA检测蛋白质能否适用？
同意。
就技术上而言，现在看见用色谱法测定“三聚氰胺”，感觉很搞笑。
想提高氮的含量，能加入的东西可不仅仅是“三聚氰胺”而已。
一个办法是：
1 取5 毫升待测鲜奶和已知鲜奶（做对照），放入 5000 MW cutoff 的透析膜中，对4000毫升PBS，（在磁力搅拌器上）搅拌、室温获4度下透析4小时。
2 用凯氏定氮法测定透析后的待测鲜奶和已知鲜奶，对比后可得出结论。
我不信这样小个化工产品可以冒充大个蛋白！
不难！
尿素是不是也可以
尿素是不是也可以
同意。
就技术上而言，现在看见用色谱法测定“三聚氰胺”，感觉很搞笑。
想提高氮的含量，能加入的东西可不仅仅是“三聚氰胺”而已。
尿素你吃吃看，要无色无味的才能参假
尿素的味道大概你品尝不出，不要认为自己没有吃过尿素，恐怕我们大多数人都摄取过尿素作为添加剂的食品。有些味精就不法添加了尿素。
一个办法是：
1 取5 毫升待测鲜奶和已知鲜奶（做对照），放入 5000 MW cutoff 的透析膜中，对4000毫升PBS，（在磁力搅拌器上）搅拌、室温获4度下透析4小时。
2 用凯氏定氮法测定透析后的待测鲜奶和已知鲜奶，对比后可得出结论。
我不信这样小个化工产品可以冒充大个蛋白！
不难！
三鹿的风险评估很不错嘛，在加入Melamine时肯定对如果被查出会带来的后果与原成本之间的评估。得出的结论是： 1，不可能被查出，因为它是免检产品。2，即使查出来，老子摆得平。
现在的结果是，1，没有被查出，但被广大的劳动人民的子孙用身体来检测出。阳性反应是：肾结石。2，正在努力通过各种渠道摆平。
期待这件案子的结果。
同理，现如今的号称什么多糖起效的东西，基本含测方法都无法排除单糖的干扰。翻看一下质量标准，基本全是硫酸苯酚、蒽铜一类的方法。加点淀粉多糖含量超级高。
有个同志说的对，质量不是靠检测出来的
今天加三聚氰胺、明天就能加四个氮的、五个氮的。。。。
总不能发挥广大劳动群众的象想，把所有能检验的，改检验的，本来不应该加的都放在质量标准里面吧
质量是靠生产出来的，不加强过程监管，人没点良心，真是，吃什么都可怕
问了下搞乳制品QA的同学，他也没说出国外有更可靠的测蛋白办法。
国外都是通过严格的流程管理来保证产品质量的，比如在奶粉的加工过程中通过技术手段杜绝人与产品接触的可能性，但是仅就这点来说，国内大厂也完全可以做到。目前问题可能出在奶站环节，那么规范奶站管理，以及更上游的奶牛管理，从而理顺所有生产环节，保证各环节的绝对安全可靠，才能有效保证食品安全。
再展开一点说，不止是奶粉，所有食品从原料生产开始就要有严格的质量保证体系，类似GAP，GMP等等，才能切实有效的保证食品安全。
另外有文献才用电化学法检测氨基酸乍看起来也是个思路，它的原理是检测氨基和羧基两个官能团。
只要重新启用古代的各种***，问题就回很好的解决。
人家掺大豆蛋白怎么办？只说检测，用近红外光谱可能是最好的，不过那东西贵啊。
人家掺大豆蛋白怎么办？只说检测，用近红外光谱可能是最好的，不过那东西贵啊。
肯定有不难的办法区别动物蛋白和植物蛋白，这要看生产厂家愿不愿意。
掺大豆蛋白与加三聚氰胺是两个不同层面上的问题，一个是造假，一个是下毒。后者已出了经济犯罪的范畴，属于刑事犯罪。
一个办法是：
1 取5 毫升待测鲜奶和已知鲜奶（做对照），放入 5000 MW cutoff 的透析膜中，对4000毫升PBS，（在磁力搅拌器上）搅拌、室温获4度下透析4小时。
2 用凯氏定氮法测定透析后的待测鲜奶和已知鲜奶，对比后可得出结论。
我不信这样小个化工产品可以冒充大个蛋白！
不难！
biuret法(容易被糖,钾离子干扰),lowry法(容易被氨干扰),好像也不怎么行.不知道传说中的考马斯亮蓝g250法怎么样呢?
参考文献:A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding .Bradford ANALYTICAL BIOCHEMISTRY 72, 248-254 (1976)
如有错误,不吝指正.聊以抛砖引玉.
bradford法测蛋白浓度，受去污剂（如trixon-100）影响。
考马斯亮蓝g250法采用的是分光光度法，误差还是有些大的
可以用凯氏定氮法,凯氏定氮法由Kieldahl于1833年首创，使其成为一种元素分析方法。各种蛋白质的组成元素中，氮的相对丰度基本稳定，含量平均为16％，而食品增稠剂瓜尔豆胶、田菁胶和胡麻胶中除蛋白质外的主要成分都不含有氮，因此试样中有机氮含量的多少代表了蛋白质含量的多少，即有机氮含量乘以蛋白质系数即为蛋白质总量。按试样用量的多少，凯氏定氮法可分为常量法和微量法。常量凯氏定氮法取样量大，分解消化后的消化液全部用于氨转化；微量凯氏定氮法取样量少，全部用于氨转化。我们主要采用微量凯氏定氮法测定蛋白质含量。 改进经典的蛋白质含量测定方法，改进凯氏定氮法的消化装置和试剂，消化后直接用甲醛法测定。结果：改进法与经典方法比较，测定结果基本一致，经t检验无显著性差异（t＝0.07556,P＞0.05)。该法分析速度快，消除了空气污染，操作简便，可用于食品中蛋白质的测定。
现在奶粉测定蛋白含量好像就用的是凯氏定氮法，三鹿添加三聚氰胺就是提高含氮量，从而造成蛋白含量高的假象，因此，凯氏定氮法方法有缺陷，强烈建议提出更科学的蛋白含量测定方法。欢迎大家献智献计！
现在的标准是采用凯氏定氮法。当然可以加三聚氰胺来提高氮含量。这些奶民的化学知识不错
凯氏定氮法+三聚氰胺的含量测定法
考马斯亮蓝g250法采用的是分光光度法，误差还是有些大的
凯氏定氮法+三聚氰胺的含量测定法
凯氏定氮 双缩脲 lowry法
三法联用
慢慢的把牛奶的紫外指纹图谱做出来
今后 LC肯定是必然选择
国外不做奶粉蛋白含量测定吗，关键对付造假要严惩
急时帖啊!是啊,国外奶粉行业标准应该有好些的办法吧?
假奶粉事件不是检测技术上的问题，是管理上的问题。再完美的技术也防不了，检测只是抽样，如果内外勾结，抽样本身就可以做手脚，那么技术再好也不能反映总体是否真正合格。国外要是出了这么大的事，ZF好下台了，一般来说，事情还在萌芽中就被管理部门发现，扼杀了。所以我看打假的话，只有国外向我们国家学习，而不是反之。
质量不是检验出来的！
检验只是质量管理中一个很小的部分。
不知道ELISA检测蛋白质能否适用？
检查是手段之一，但是疏导终于堵漏，应该加强管理，从源头奶管理入手，实行产供销一体经营制，而非合作化！
凯氏定氮 双缩脲 lowry法
三法联用
慢慢的把牛奶的紫外指纹图谱做出来
今后 LC肯定是必然选择
应该用新的方法来测定蛋白含量啦，但是每种方法都有他们的优缺点，要是想掺假用哪种方法都不行的
我认为考马斯亮蓝比较好啊
一个办法是：
1 取5 毫升待测鲜奶和已知鲜奶（做对照），放入 5000 MW cutoff 的透析膜中，对4000毫升PBS，（在磁力搅拌器上）搅拌、室温获4度下透析4小时。
2 用凯氏定氮法测定透析后的待测鲜奶和已知鲜奶，对比后可得出结论。
我不信这样小个化工产品可以冒充大个蛋白！
不难！
质量不是检验出来的！
检验只是质量管理中一个很小的部分。
不知道ELISA检测蛋白质能否适用？
同意。
就技术上而言，现在看见用色谱法测定“三聚氰胺”，感觉很搞笑。
想提高氮的含量，能加入的东西可不仅仅是“三聚氰胺”而已。
一个办法是：
1 取5 毫升待测鲜奶和已知鲜奶（做对照），放入 5000 MW cutoff 的透析膜中，对4000毫升PBS，（在磁力搅拌器上）搅拌、室温获4度下透析4小时。
2 用凯氏定氮法测定透析后的待测鲜奶和已知鲜奶，对比后可得出结论。
我不信这样小个化工产品可以冒充大个蛋白！
不难！
尿素是不是也可以
尿素是不是也可以
同意。
就技术上而言，现在看见用色谱法测定“三聚氰胺”，感觉很搞笑。
想提高氮的含量，能加入的东西可不仅仅是“三聚氰胺”而已。
尿素你吃吃看，要无色无味的才能参假
尿素的味道大概你品尝不出，不要认为自己没有吃过尿素，恐怕我们大多数人都摄取过尿素作为添加剂的食品。有些味精就不法添加了尿素。
一个办法是：
1 取5 毫升待测鲜奶和已知鲜奶（做对照），放入 5000 MW cutoff 的透析膜中，对4000毫升PBS，（在磁力搅拌器上）搅拌、室温获4度下透析4小时。
2 用凯氏定氮法测定透析后的待测鲜奶和已知鲜奶，对比后可得出结论。
我不信这样小个化工产品可以冒充大个蛋白！
不难！
三鹿的风险评估很不错嘛，在加入Melamine时肯定对如果被查出会带来的后果与原成本之间的评估。得出的结论是： 1，不可能被查出，因为它是免检产品。2，即使查出来，老子摆得平。
现在的结果是，1，没有被查出，但被广大的劳动人民的子孙用身体来检测出。阳性反应是：肾结石。2，正在努力通过各种渠道摆平。
期待这件案子的结果。
同理，现如今的号称什么多糖起效的东西，基本含测方法都无法排除单糖的干扰。翻看一下质量标准，基本全是硫酸苯酚、蒽铜一类的方法。加点淀粉多糖含量超级高。
有个同志说的对，质量不是靠检测出来的
今天加三聚氰胺、明天就能加四个氮的、五个氮的。。。。
总不能发挥广大劳动群众的象想，把所有能检验的，改检验的，本来不应该加的都放在质量标准里面吧
质量是靠生产出来的，不加强过程监管，人没点良心，真是，吃什么都可怕
问了下搞乳制品QA的同学，他也没说出国外有更可靠的测蛋白办法。
国外都是通过严格的流程管理来保证产品质量的，比如在奶粉的加工过程中通过技术手段杜绝人与产品接触的可能性，但是仅就这点来说，国内大厂也完全可以做到。目前问题可能出在奶站环节，那么规范奶站管理，以及更上游的奶牛管理，从而理顺所有生产环节，保证各环节的绝对安全可靠，才能有效保证食品安全。
再展开一点说，不止是奶粉，所有食品从原料生产开始就要有严格的质量保证体系，类似GAP，GMP等等，才能切实有效的保证食品安全。
另外有文献才用电化学法检测氨基酸乍看起来也是个思路，它的原理是检测氨基和羧基两个官能团。
只要重新启用古代的各种***，问题就回很好的解决。
人家掺大豆蛋白怎么办？只说检测，用近红外光谱可能是最好的，不过那东西贵啊。
人家掺大豆蛋白怎么办？只说检测，用近红外光谱可能是最好的，不过那东西贵啊。
肯定有不难的办法区别动物蛋白和植物蛋白，这要看生产厂家愿不愿意。
掺大豆蛋白与加三聚氰胺是两个不同层面上的问题，一个是造假，一个是下毒。后者已出了经济犯罪的范畴，属于刑事犯罪。
一个办法是：
1 取5 毫升待测鲜奶和已知鲜奶（做对照），放入 5000 MW cutoff 的透析膜中，对4000毫升PBS，（在磁力搅拌器上）搅拌、室温获4度下透析4小时。
2 用凯氏定氮法测定透析后的待测鲜奶和已知鲜奶，对比后可得出结论。
我不信这样小个化工产品可以冒充大个蛋白！
不难！